【摘 要】
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目的:探讨敲减DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)的表达是否促进细胞周期相关转录因子E2F转录因子1(E2F1)诱导人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)向动脉内皮细胞分化及血管形成.方法:体外培养hUCMSCs,将细胞分为对照组、E2F1过表达组(E2F1组)、DNMT3A敲减组(siDNMT3A组)和联合诱导组(E2F1+siDNMT3A组);倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用RT-qPCR和Western blot检测动脉特异性标志物ephrin-B2和HEY2的mRNA及蛋白水平;成管实验检测分化后
【机 构】
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天津科技大学生物工程学院,天津300457;山东大学齐鲁医院低温医学研究室,山东济南250000
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目的:探讨敲减DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)的表达是否促进细胞周期相关转录因子E2F转录因子1(E2F1)诱导人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)向动脉内皮细胞分化及血管形成.方法:体外培养hUCMSCs,将细胞分为对照组、E2F1过表达组(E2F1组)、DNMT3A敲减组(siDNMT3A组)和联合诱导组(E2F1+siDNMT3A组);倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用RT-qPCR和Western blot检测动脉特异性标志物ephrin-B2和HEY2的mRNA及蛋白水平;成管实验检测分化后hUCMSCs的体外管状结构形成能力;裸鼠基质胶塞实验结合CD31染色检测分化后hUCMSCs的体内生成血管情况.结果:RT-qPCR和Western blot结果显示,与对照组相比,siDNMT3A组ephrin-B2和HEY2的mRNA及蛋白水平均显著升高(P<0.01);与siDNMT3A组相比,E2F1+siDNMT3A组HEY2和ephrin-B2的mRNA及蛋白水平进一步升高(P<0.01).体内和体外成管实验证明,除对照组外,其他3个诱导组的细胞均可形成管腔样结构,其中E2F1+siDNMT3A组的成管能力最强.结论:与单一过表达E2F1或敲减DNMT3A比较,敲减DNMT3A表达同时过表达E2F1的hUCMSCs向动脉内皮细胞分化和血管形成能力更强.
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背景 与目的:破坏铜离子在体内的平衡可能会促进癌症的发生、发展.研究铜离子对肺癌细胞增殖的影响,分析铜离子及铜伴侣蛋白编码基因在肺癌及正常肺组织中的表达差异及其临床意义.方法:以肺癌细胞和肺正常细胞系为细胞模型,通过细胞增殖实验检测铜离子对细胞增殖能力的影响,通过蛋白质印迹法(Western blot)实验检测不同浓度铜离子溶液处理细胞后对细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)/磷酸化ERK(phosphorylated ERK,p-ER
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