人EPO高效表达细胞株的筛选与鉴定

• 作 者: 孙丽翠 刘芃芃 刘维全 张玉国 齐顺章 祁雅慧
• 机 构: 中国农业大学生物学院,首都医科大学实验中心
• 出 处: 生物技术
• 发表日期: 2004年5期
• 关键词: EPO 高效表达细胞株 MTX 鉴定 EPO highly-expressing cell strain MTX Identification
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (3950 0 0 84)

用氨甲喋呤(MTX)对稳定转染人促红细胞生成素(EPO)基因的CHO^-(DHFR缺陷型)细胞株进行梯度加压，并使用α-MEM培养基进行培养，使DHFR基因在CHO^-细胞中大量扩增，从而使EPO的表达量提高。经检测分析EPO的表达量，筛选出EPO高效表达的细胞株。结果表明，用MTX加压到16×10^-7mol/L和64×10^-7mol/l浓度时，收集的细胞培养液经(NH4)2SO4盐析、透析等处理得到EPO抽提液，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测出与标准品相对应