【摘 要】
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目的:研究人EGFR胞外段在原核本系的表达、纯化条件以及对小鼠的免疫原性.方法:以既往构建包含人EGFR胞外段基因的表达质粒为基础,采用基因工程方法构建pET原核表达载体.在大
【机 构】
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四川大学华西医院教育部人类疾病生物治疗重点实验室与肿瘤中心,四川大学华西二医院
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目的:研究人EGFR胞外段在原核本系的表达、纯化条件以及对小鼠的免疫原性.方法:以既往构建包含人EGFR胞外段基因的表达质粒为基础,采用基因工程方法构建pET原核表达载体.在大肠杆菌中表达目的蛋白,表达蛋白在变性条件下,通过Ni2+柱亲和层析纯化以包涵体形式存在的His-Tag融合蛋白,SDS-PAGE检测其纯度.去余His-Tag的纯化蛋白在梯度尿素中透析复性.以复性蛋白免疫小鼠获得抗血清,western blotting及流式细胞仪检测特异抗体的存在.结论:通过限制酶切分析及测序鉴定表明获得了人EGF
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