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摘要 以MS为基本培养基，附加不同浓度的2，4-D、NAA、6-BA，研究不同激素水平对人参茎段诱导不定芽的影响。结果表明：MS培养基 2，4-D 0.1mg/L NAA 0.1mg/L 6-BA 0.5 mg/L诱导效果最好，出芽率可达100%。不定芽在适宜培养基上能快速增殖。带腋芽茎段在培养过程中可产生丛生芽，经继代培养可大量增殖。小苗在1/2 MS培养基中容易生根，健壮小苗经驯化后移栽，成活率可达100%，建立了人参的快繁体系。
关键词 人参；幼芽；组织培养；快速繁殖
中图分类号 Q813.1 2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2012）14-0056-01
人参具有重要的医疗保健价值和巨大的经济效益，自古以来就被人们枧为珍品。但是人参自然生长缓慢，发育期长达5～7年，对生长环境要求严格，对培育新品种和大量生产造成很大的困难[1-3]。自20世纪60年代以来，人参组织培养技术得到深入的研究和应用。研究人员希望通过植物组培等新技术，在人工控制条件下大量繁殖人参有效的组织或细胞，使人参生产摆脱自然环境条件的限制，同时达到快速培育新品种的目的[4-5]。该文通过人参茎段快速诱导不定芽的方法，大量繁殖人参幼苗，以为快速获得人参无菌苗开辟新途径。
1 材料与方法
1.1 试验材料
取人参幼茎若干，经自来水冲洗5～6次，放在吸水纸上将其晾干。接着用刀片将幼茎切成1 cm的小段，经过一段时间培养后形成不定芽。
1.2 试验方法
1.2.1 外植体消毒。取人参外植体的幼茎，将处理晾干后的材料转入高压消毒的烧杯中，在超净工作台上先用75%酒精浸泡杀菌30 s，去除酒精后用无菌水漂洗3～4次，之后迅速加入0.1%升汞液浸泡杀菌8～10 min，浸泡过程中经常摇动烧杯。倒掉升汞液，用无菌水冲洗4～5次，最后用无菌水浸泡备用[6]。
1.2.2 初代培养。将消毒后的人参幼茎切成若干1 cm的小茎段，接种于诱导不定芽培养基。设定3种培养基配比关系：MS培养基 3%蔗糖 2，4-D 0.1 mg/L NAA 0.1 mg/L 6-BA 0.5 mg/L 琼脂0.75%，pH值为5.8；MS培养基 3%蔗糖 2，4-D 0.2 mg/L NAA 0.5 mg/L 6-BA 1.0 mg/L 琼脂0.75%，pH值为5.8；MS培养基 3%蔗糖 2，4-D 0.3 mg/L NAA 1.0 mg/L 6-BA 2.0 mg/L 琼脂0.75%，pH值为5.8。培养温度为23～27 ℃，湿度30%，光照强度2 000 lx，光照时间为14 h/d，培养数天后观察其变化。
1.2.3 继代培养。切取诱导形成的不定芽转移至不定芽扩繁培养基，采用MS 3%蔗糖 NAA 0.5 mg/L 6-BA 1.0 mg/L 琼脂0.75%进行扩繁，15～20 d分离诱导的丛生芽，在生根培养基转接生长健壮、长势良好的人参小苗，其余的单芽再进行继代培养[7]。
1.2.4 生根培养。在生根培养基1/2MS NAA 1.0 mg/L上培养高2～3 cm、2～3片叶的单株幼苗。培养条件：温度（25±2）℃，光照2 000 lx，光照時间12 h/d。
2 结果与分析
2.1 人参茎段诱导培养
采取3种激素配比培养基对人参茎段进行诱导不定芽，结果表明：MS培养基 3%蔗糖 2，4-D 0.1 mg/L NAA 0.1 mg/L 6-BA 0.5 mg/L 琼脂0.75%诱导效果最佳，诱导时间最短，芽点在培养10 d后出现，15 d后长出茎段长出不定芽，一般在茎段有节点处长出芽点，每个茎段外植体可诱导出1～3个不定芽。
2.2 芽的继代增殖培养
将茎段外植体上诱导长出的单芽接种到继代增殖培养基后1周，即可见长出新的丛芽。15 d时丛生芽数平均为3个，25 d时丛生芽数平均增至5个，继代增殖周期为15～25 d。
2.3 生根培养
丛生芽继代培养后长出幼叶，将其单株转至生根培养基，培养30 d后可见根系。
3 结论与讨论
近年来，对人参的组织培养研究主要集中在人参叶片
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（上接第56页）
及人参根的培养方面，通过诱导愈伤组织获得人参幼芽，此途径步骤复杂，耗时长，不能短时间内获得无菌苗，而且愈伤组织出芽率低，在很大程度上阻碍了人参大规模的生产。该研究省略了愈伤组织诱导培养过程，通过直接器官发生途径诱导出芽，培养周期短，再生频率高，而且未经脱分化的细胞直接分化成幼芽，体细胞无性系变异小程度较，能较好地保持植物的遗传稳定性。若是将其作为转化外源基因的受体植物，目的基因也能稳定遗传，受基因型的限制较小[8-12]。
4 参考文献
[1] 刘贤旺.人参组织培养研究的进展[J].江西中医学院学报，1993，5（3）：51-54.
[2] 安永辉，郭昶，孙振雷，等.人参的组织培养及快繁体系的建立[J].安徽农业科学，2008，36（27）：11656-11657.
[3] 赵俊，马林，刘翔，等.土人参愈伤组织诱导及植株快繁体系建立[J].西南科技大学学报，2009，24（1）：103-107.
[4] 张玲，马林，李卫锋.生姜组织培养的快繁技术[J].山地农业生物学报，2003，22（2）：173-175.
[5] 陆文梁，夏小娣.人参组织与细胞培养研究的进展[J].植物学通报，1991，8（1）：14-21.
[6] 许培芳.根癌农杆菌介导的ANTI-CTLA-4-HS83基因遗传转化甘薯的研究[D].成都：西南交通大学，2008.
[7] 阳立恒.新疆棉花再生体系的建立及其遗传转化影响因素的研究[D].乌鲁木齐：新疆农业大学，2008.
[8] KWON S Y，JO S H，LEE O S，et al.Transgenic ginseng cell lines that produce high levels of a human lactoferrin[J].Planta Med，2003，69（11）：1005-1008.
[9] 刘丹，于海鹏，盛军，等.乙肝病毒表面抗原基因在人参细胞中的表达[J].植物生理与分子生物学学报，2005，31（5）：551-554.
[10] 陈历俊，姜铁民.乳铁蛋白生物学功能及基因表达[M].北京：科学出版社，2007：156-157.
[11] 王国平，肖蓉，李春燕，等.枣茎段再生体系建立的研究[J].中国农学通报，2011，27（31）：184-188.
[12] 王建华，王义，孙国伟，等.人参组织培养的多因子正交试验研究[J].吉林农业大学学报，2008，28（6）：648-651.
关键词 人参；幼芽；组织培养；快速繁殖
中图分类号 Q813.1 2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2012）14-0056-01
人参具有重要的医疗保健价值和巨大的经济效益，自古以来就被人们枧为珍品。但是人参自然生长缓慢，发育期长达5～7年，对生长环境要求严格，对培育新品种和大量生产造成很大的困难[1-3]。自20世纪60年代以来，人参组织培养技术得到深入的研究和应用。研究人员希望通过植物组培等新技术，在人工控制条件下大量繁殖人参有效的组织或细胞，使人参生产摆脱自然环境条件的限制，同时达到快速培育新品种的目的[4-5]。该文通过人参茎段快速诱导不定芽的方法，大量繁殖人参幼苗，以为快速获得人参无菌苗开辟新途径。
1 材料与方法
1.1 试验材料
取人参幼茎若干，经自来水冲洗5～6次，放在吸水纸上将其晾干。接着用刀片将幼茎切成1 cm的小段，经过一段时间培养后形成不定芽。
1.2 试验方法
1.2.1 外植体消毒。取人参外植体的幼茎，将处理晾干后的材料转入高压消毒的烧杯中，在超净工作台上先用75%酒精浸泡杀菌30 s，去除酒精后用无菌水漂洗3～4次，之后迅速加入0.1%升汞液浸泡杀菌8～10 min，浸泡过程中经常摇动烧杯。倒掉升汞液，用无菌水冲洗4～5次，最后用无菌水浸泡备用[6]。
1.2.2 初代培养。将消毒后的人参幼茎切成若干1 cm的小茎段，接种于诱导不定芽培养基。设定3种培养基配比关系：MS培养基 3%蔗糖 2，4-D 0.1 mg/L NAA 0.1 mg/L 6-BA 0.5 mg/L 琼脂0.75%，pH值为5.8；MS培养基 3%蔗糖 2，4-D 0.2 mg/L NAA 0.5 mg/L 6-BA 1.0 mg/L 琼脂0.75%，pH值为5.8；MS培养基 3%蔗糖 2，4-D 0.3 mg/L NAA 1.0 mg/L 6-BA 2.0 mg/L 琼脂0.75%，pH值为5.8。培养温度为23～27 ℃，湿度30%，光照强度2 000 lx，光照时间为14 h/d，培养数天后观察其变化。
1.2.3 继代培养。切取诱导形成的不定芽转移至不定芽扩繁培养基，采用MS 3%蔗糖 NAA 0.5 mg/L 6-BA 1.0 mg/L 琼脂0.75%进行扩繁，15～20 d分离诱导的丛生芽，在生根培养基转接生长健壮、长势良好的人参小苗，其余的单芽再进行继代培养[7]。
1.2.4 生根培养。在生根培养基1/2MS NAA 1.0 mg/L上培养高2～3 cm、2～3片叶的单株幼苗。培养条件：温度（25±2）℃，光照2 000 lx，光照時间12 h/d。
2 结果与分析
2.1 人参茎段诱导培养
采取3种激素配比培养基对人参茎段进行诱导不定芽，结果表明：MS培养基 3%蔗糖 2，4-D 0.1 mg/L NAA 0.1 mg/L 6-BA 0.5 mg/L 琼脂0.75%诱导效果最佳，诱导时间最短，芽点在培养10 d后出现，15 d后长出茎段长出不定芽，一般在茎段有节点处长出芽点，每个茎段外植体可诱导出1～3个不定芽。
2.2 芽的继代增殖培养
将茎段外植体上诱导长出的单芽接种到继代增殖培养基后1周，即可见长出新的丛芽。15 d时丛生芽数平均为3个，25 d时丛生芽数平均增至5个，继代增殖周期为15～25 d。
2.3 生根培养
丛生芽继代培养后长出幼叶，将其单株转至生根培养基，培养30 d后可见根系。
3 结论与讨论
近年来，对人参的组织培养研究主要集中在人参叶片
（下转第59页）
（上接第56页）
及人参根的培养方面，通过诱导愈伤组织获得人参幼芽，此途径步骤复杂，耗时长，不能短时间内获得无菌苗，而且愈伤组织出芽率低，在很大程度上阻碍了人参大规模的生产。该研究省略了愈伤组织诱导培养过程，通过直接器官发生途径诱导出芽，培养周期短，再生频率高，而且未经脱分化的细胞直接分化成幼芽，体细胞无性系变异小程度较，能较好地保持植物的遗传稳定性。若是将其作为转化外源基因的受体植物，目的基因也能稳定遗传，受基因型的限制较小[8-12]。
4 参考文献
[1] 刘贤旺.人参组织培养研究的进展[J].江西中医学院学报，1993，5（3）：51-54.
[2] 安永辉，郭昶，孙振雷，等.人参的组织培养及快繁体系的建立[J].安徽农业科学，2008，36（27）：11656-11657.
[3] 赵俊，马林，刘翔，等.土人参愈伤组织诱导及植株快繁体系建立[J].西南科技大学学报，2009，24（1）：103-107.
[4] 张玲，马林，李卫锋.生姜组织培养的快繁技术[J].山地农业生物学报，2003，22（2）：173-175.
[5] 陆文梁，夏小娣.人参组织与细胞培养研究的进展[J].植物学通报，1991，8（1）：14-21.
[6] 许培芳.根癌农杆菌介导的ANTI-CTLA-4-HS83基因遗传转化甘薯的研究[D].成都：西南交通大学，2008.
[7] 阳立恒.新疆棉花再生体系的建立及其遗传转化影响因素的研究[D].乌鲁木齐：新疆农业大学，2008.
[8] KWON S Y，JO S H，LEE O S，et al.Transgenic ginseng cell lines that produce high levels of a human lactoferrin[J].Planta Med，2003，69（11）：1005-1008.
[9] 刘丹，于海鹏，盛军，等.乙肝病毒表面抗原基因在人参细胞中的表达[J].植物生理与分子生物学学报，2005，31（5）：551-554.
[10] 陈历俊，姜铁民.乳铁蛋白生物学功能及基因表达[M].北京：科学出版社，2007：156-157.
[11] 王国平，肖蓉，李春燕，等.枣茎段再生体系建立的研究[J].中国农学通报，2011，27（31）：184-188.
[12] 王建华，王义，孙国伟，等.人参组织培养的多因子正交试验研究[J].吉林农业大学学报，2008，28（6）：648-651.