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【摘要】 目的 探讨冰冻血小板融化复苏后的稳定性。方法 将血小板分别置于80℃和90℃~120℃保存,观察冰冻血小板融化复苏后纤维蛋白及絮状聚集物的情况。结果 80℃保存血小板纤维蛋白及絮状聚集率为23%,90℃~120℃保存血小板纤维蛋白及絮状聚集率为0。血小板保存温度不同,纤维蛋白及絮状聚集发生率的差异有显著性(χ2=219.64,P<0.01),冰冻血小板冷冻速度和保存温度对血小板质量的影响有显著性。结论 冰冻血小板于90℃~120℃保存的稳定性比较好。
【关键词】
冰冻血小板;纤维蛋白; 絮状聚集物
Study on the stability of melt resuscitative frozen platelets
XU Xuexin,HAN Haixin,YU Dong.Department of Blood Transfusion,Nanyang Central Hospital Nanyang 473009,China
【Abstract】 Objective To study the stability of melt resuscitative frozen platelets.Methods Frozen platelets were stored in different temperature,at80℃ and90℃~120℃ respectively.The formation of fibrin and irreversible aggregation in these melt resuscitative frozen platelets were observed.Results The rate of fibrin and irreversible aggregation was 23%when platelets were stored at80℃.The rate of fibrin and irreversible aggregation was 0 when platelets were stored at90℃~120℃.In different temperature the formation of fibrin and irreversible aggregation were significantly different(χ2=219.64,P<0.01).The maintain temperature and frozen velocity inplatelets could affect the quality of platelets.Conclusion Frozen platelets stored at90℃~120℃ have good stability ofmelt resuscitative frozen platelets by preservation the labile coagulation factors in platelets.
【Key words】
Frozen platelets;Fibrin;Irreversible aggregation
DOI:10.3760/cma.j.issn 16738799.2010.01.32
作者单位:473009河南省南阳市中心医院输血科
80℃以下保存血小板可有效延长保存期,临床使用效果好,有助于缓解临床供求的矛盾,配合新鲜血小板使用是有益的补充。但冰冻血小板在融化过程可出现纤维蛋白或絮状不可逆聚集现象,这种不稳定性会直接影响血小板的质量和临床输注效果。本科在市中心血站的配合支持下对冷冻血小板保存和速冻过程进行对比分析,发现保存温度及速冻速率对冷冻血小板融化后稳定性有影响。现总结报告如下。
1 材料与方法
1.1 设备 80℃超低温冰箱(日本SANYO公司);130℃超低温冰柜(日本SANYO公司); 42℃电热恒温水浴箱(北京医疗设备厂);数字显示测温仪(美国血液技术公司);血小板保存箱(美国血液技术公司);澄明度检测仪(天津无线电厂)。
1.2 方法
1.2.1 5%~6%DMSO加入机采新鲜血小板中,血小板采集量均>2.5×1011/袋;分别置于调节并显示温度分别为80℃、90℃~120℃之间的超低温保存箱中冷冻保存。
1.2.2 冰冻血小板稳定性 冰冻血小板在42℃快速融化解冻复苏后,在澄明度检测仪前肉眼观察是否有絮状聚集物或纤维蛋白析出,有则判稳定性为不合格;若无以上现象,血小板呈均匀云雾状,则判稳定性为合格。
1.2.3 临床输往前,迅速把不同保存温度的冷冻血小板取出并立即于42℃水浴箱中融化解冻复苏,时间控制在3 min左右。判断冰冻血小板的稳定性。
1.2.4 分别在冷冻保存前震荡3 h后加入DMSO,与采集后直接加入 DMSO的冰冻血小板于80℃~120℃冷冻保存。临床使用前于相同条件下迅速融化复苏,观察冷冻血小板的稳定性。
1.2.5 在不同冷冻保存温度下,使用数字显示測温仅分别检测血小板内部实际速冻速度,主要考察0℃以上温度下降速度、0℃~30℃、31℃~40℃、41℃~70℃和71℃~80℃的下降速度。
1.3 统计学方法 采用SPSS 10.0统计软件包进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,计数资料用率(%)表示,各组间的均数比较采用t检验,率的比较用 χ2检验。检验水准α=0.05,P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 80℃保存的冰冻血小板共100袋,出现絮状聚集物或纤维蛋白等不稳定性的有23袋(占23%)。90℃~120℃保存的冰冻血小板共682袋,无不稳定现象发生。两者比较有显著性差异(χ2=219.64,P<0.01),见表1。
表1
两种温度条件储存冰冻血小板融化后纤维蛋白及絮状聚集物析出情况
保存温度(℃)n絮状聚集物(袋)构成比(%)纤维蛋白(袋)构成比(%)稳定(袋)构成比(%)
80℃1001414.0099.007777.00
≤90℃68200000100.00
注:χ2=219.64,P<0.01
2.2 采集血小板放置 血小板震荡箱保存3 h后再加入DMSO制备的冰冻血小板,与未经震荡制备的冰冻血小板均置于90℃~120℃保存,两者稳定性的差异无显著性。见表2。
表2
不同方式处理后于90℃~120℃保存冰冻
血小板的稳定性
制备前处理n(袋)絮状聚集物(袋)纤维蛋白(袋)稳定(袋)构成比(%)
未经震荡47400474100.00
震荡3 h21900219100.00
合计69300693100.00
3 讨论
冰冻血小板的稳定性以及融化复苏后以是否有絮状聚集物或纤维蛋白析出为判断标准。稳定性是影响冰冻血小板质量的主要原因,也是影响临床使用效果的因素之一。血液采集时间较长、穿刺不顺利、血流不畅等可造成血小板损伤,DMSO产生的热量可灼伤血小板和血浆蛋白,而融化温度过高或过低等也可造成纤维蛋白的析出和血小板损伤而产生絮状物[1]。纤维蛋白和血小板损伤正是冰冻血小板融化复苏后出现析出物的主要原因[2]。本文实验显示,80℃保存冰冻血小板100袋出现絮状聚集物和纤维蛋白等不稳定性因素有23袋(占23%)。保存于90℃以下的血小板682袋无不稳定现象的发生。两者比较差异有显著性(P<0.01)。表明冰冻保存血小板的冷冻温度是影响絮状聚集物和纤维蛋白产生的因素之一。表2资料显示,90℃保存443袋。100℃保存154袋、110℃~120℃之间保存85袋,均未发现融化复苏后絮状聚集物和纤维蛋白析出等不稳定现象。进一步表明冷冻保存温度在90℃以下可防止冰冻血小板融化复苏后不稳定因素的发生。
血小板采集后经过3 h震荡可使血小板充分解聚,加入DMSO后可快速得到均匀,对冷冻血小板的稳定性可能起到一定的作用。有人认为:加药前经过3 h的震荡可使冰冻血小板融化后聚集物明显减少[3]。数据显示:只要确认采集后无血小板聚集现象存在,立即加药与震荡3 h后加药于90℃以下冷冻保存的冰冻血小板融化复苏后稳定性的差异无显著性。加药前是否需要震荡应以血小板是否存在聚集现象而定,震荡时间过长可能对冷冻血小板的回收率产生影响。数据显示,2005~2007年共制备冰冻保存血小板474袋,加药前均未震荡3 h,采集后确认无聚集现象后立即加药及时放置90℃~120℃保存,临床使用前融化复苏均保持良好的稳定性,表明加药前只需要确认血小板是否存在聚集现象,震荡3 h对冰冻血小板的稳定性没有多大帮助。
将数字显示温度计的探头放置到与血小板体积相当的血浆里,然后将血浆分别置于不同贮存温度中冷冻保存,检测不同温度条件下血浆内部实际的冷冻速度。结果显示:调节温度在90℃、100℃和120℃三种情况下,血小板在0℃以上、0℃、30℃、40℃、70℃等不同温度区域的实际降温速度与调节温度在80℃时的降温速度比较,差异有显著性(P<0.05)。虽然众多资料表明DMSO作冷冻保护剂,不控制降温速度,80℃冰箱冷冻保存血小板在临床应用中效果明显。同样也有报道80℃冷冻保存血小板融化复苏后有絮状聚集物或纤维蛋白析出等不稳定现象的发生。本研究显示,调节冰箱温度为80℃时,0℃以下冷冻保存血小板内部实际降温速度较慢,特别是关键的0℃和30℃~40℃的下降速度。而冰箱调节温度在90℃以下,冰冻保存血小板内部实际降温速度可以达到(1~3)℃/min。有报道血小板冷冻保存的冷却速度一般控制在(1~2)℃/min[4]。結合以上资料,笔者认为冰冻血小板内部实际降温速度是确保冷冻血小板稳定性的主要因素。确保冰冻血小板的稳定性,避免融化后纤维蛋白或絮状聚集物等不稳定性因素的产生,控制好血小板采集时间,加入DMSO的速度保持稳定,确认加药前血小板没有聚集现象都是必要的。在无速率降温仪的情况下,血小板冷冻保存在90℃~120℃可以确保冷冻血小板的稳定性。
参考文献
[1] 陈兴智,李聚林,张源,等.冰冻血小板的制备的稳定性研究.临床输血与检验,2007,1(10):4851.
[2] 丁国良,赵树华,王珍,等.冻存血小板中出现絮状物的原因分析.临床输血与检验,2004,6(2):114.
[3] 孙艳萍,袁媛,陈召江,等.冰冻血小板融化复苏后不可逆聚集的原因分析.临床输血与检验,2005,7(2): 8889.
[4] 王培华.输血技术学.人民卫生出版社,2002:76.
【关键词】
冰冻血小板;纤维蛋白; 絮状聚集物
Study on the stability of melt resuscitative frozen platelets
XU Xuexin,HAN Haixin,YU Dong.Department of Blood Transfusion,Nanyang Central Hospital Nanyang 473009,China
【Abstract】 Objective To study the stability of melt resuscitative frozen platelets.Methods Frozen platelets were stored in different temperature,at80℃ and90℃~120℃ respectively.The formation of fibrin and irreversible aggregation in these melt resuscitative frozen platelets were observed.Results The rate of fibrin and irreversible aggregation was 23%when platelets were stored at80℃.The rate of fibrin and irreversible aggregation was 0 when platelets were stored at90℃~120℃.In different temperature the formation of fibrin and irreversible aggregation were significantly different(χ2=219.64,P<0.01).The maintain temperature and frozen velocity inplatelets could affect the quality of platelets.Conclusion Frozen platelets stored at90℃~120℃ have good stability ofmelt resuscitative frozen platelets by preservation the labile coagulation factors in platelets.
【Key words】
Frozen platelets;Fibrin;Irreversible aggregation
DOI:10.3760/cma.j.issn 16738799.2010.01.32
作者单位:473009河南省南阳市中心医院输血科
80℃以下保存血小板可有效延长保存期,临床使用效果好,有助于缓解临床供求的矛盾,配合新鲜血小板使用是有益的补充。但冰冻血小板在融化过程可出现纤维蛋白或絮状不可逆聚集现象,这种不稳定性会直接影响血小板的质量和临床输注效果。本科在市中心血站的配合支持下对冷冻血小板保存和速冻过程进行对比分析,发现保存温度及速冻速率对冷冻血小板融化后稳定性有影响。现总结报告如下。
1 材料与方法
1.1 设备 80℃超低温冰箱(日本SANYO公司);130℃超低温冰柜(日本SANYO公司); 42℃电热恒温水浴箱(北京医疗设备厂);数字显示测温仪(美国血液技术公司);血小板保存箱(美国血液技术公司);澄明度检测仪(天津无线电厂)。
1.2 方法
1.2.1 5%~6%DMSO加入机采新鲜血小板中,血小板采集量均>2.5×1011/袋;分别置于调节并显示温度分别为80℃、90℃~120℃之间的超低温保存箱中冷冻保存。
1.2.2 冰冻血小板稳定性 冰冻血小板在42℃快速融化解冻复苏后,在澄明度检测仪前肉眼观察是否有絮状聚集物或纤维蛋白析出,有则判稳定性为不合格;若无以上现象,血小板呈均匀云雾状,则判稳定性为合格。
1.2.3 临床输往前,迅速把不同保存温度的冷冻血小板取出并立即于42℃水浴箱中融化解冻复苏,时间控制在3 min左右。判断冰冻血小板的稳定性。
1.2.4 分别在冷冻保存前震荡3 h后加入DMSO,与采集后直接加入 DMSO的冰冻血小板于80℃~120℃冷冻保存。临床使用前于相同条件下迅速融化复苏,观察冷冻血小板的稳定性。
1.2.5 在不同冷冻保存温度下,使用数字显示測温仅分别检测血小板内部实际速冻速度,主要考察0℃以上温度下降速度、0℃~30℃、31℃~40℃、41℃~70℃和71℃~80℃的下降速度。
1.3 统计学方法 采用SPSS 10.0统计软件包进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,计数资料用率(%)表示,各组间的均数比较采用t检验,率的比较用 χ2检验。检验水准α=0.05,P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 80℃保存的冰冻血小板共100袋,出现絮状聚集物或纤维蛋白等不稳定性的有23袋(占23%)。90℃~120℃保存的冰冻血小板共682袋,无不稳定现象发生。两者比较有显著性差异(χ2=219.64,P<0.01),见表1。
表1
两种温度条件储存冰冻血小板融化后纤维蛋白及絮状聚集物析出情况
保存温度(℃)n絮状聚集物(袋)构成比(%)纤维蛋白(袋)构成比(%)稳定(袋)构成比(%)
80℃1001414.0099.007777.00
≤90℃68200000100.00
注:χ2=219.64,P<0.01
2.2 采集血小板放置 血小板震荡箱保存3 h后再加入DMSO制备的冰冻血小板,与未经震荡制备的冰冻血小板均置于90℃~120℃保存,两者稳定性的差异无显著性。见表2。
表2
不同方式处理后于90℃~120℃保存冰冻
血小板的稳定性
制备前处理n(袋)絮状聚集物(袋)纤维蛋白(袋)稳定(袋)构成比(%)
未经震荡47400474100.00
震荡3 h21900219100.00
合计69300693100.00
3 讨论
冰冻血小板的稳定性以及融化复苏后以是否有絮状聚集物或纤维蛋白析出为判断标准。稳定性是影响冰冻血小板质量的主要原因,也是影响临床使用效果的因素之一。血液采集时间较长、穿刺不顺利、血流不畅等可造成血小板损伤,DMSO产生的热量可灼伤血小板和血浆蛋白,而融化温度过高或过低等也可造成纤维蛋白的析出和血小板损伤而产生絮状物[1]。纤维蛋白和血小板损伤正是冰冻血小板融化复苏后出现析出物的主要原因[2]。本文实验显示,80℃保存冰冻血小板100袋出现絮状聚集物和纤维蛋白等不稳定性因素有23袋(占23%)。保存于90℃以下的血小板682袋无不稳定现象的发生。两者比较差异有显著性(P<0.01)。表明冰冻保存血小板的冷冻温度是影响絮状聚集物和纤维蛋白产生的因素之一。表2资料显示,90℃保存443袋。100℃保存154袋、110℃~120℃之间保存85袋,均未发现融化复苏后絮状聚集物和纤维蛋白析出等不稳定现象。进一步表明冷冻保存温度在90℃以下可防止冰冻血小板融化复苏后不稳定因素的发生。
血小板采集后经过3 h震荡可使血小板充分解聚,加入DMSO后可快速得到均匀,对冷冻血小板的稳定性可能起到一定的作用。有人认为:加药前经过3 h的震荡可使冰冻血小板融化后聚集物明显减少[3]。数据显示:只要确认采集后无血小板聚集现象存在,立即加药与震荡3 h后加药于90℃以下冷冻保存的冰冻血小板融化复苏后稳定性的差异无显著性。加药前是否需要震荡应以血小板是否存在聚集现象而定,震荡时间过长可能对冷冻血小板的回收率产生影响。数据显示,2005~2007年共制备冰冻保存血小板474袋,加药前均未震荡3 h,采集后确认无聚集现象后立即加药及时放置90℃~120℃保存,临床使用前融化复苏均保持良好的稳定性,表明加药前只需要确认血小板是否存在聚集现象,震荡3 h对冰冻血小板的稳定性没有多大帮助。
将数字显示温度计的探头放置到与血小板体积相当的血浆里,然后将血浆分别置于不同贮存温度中冷冻保存,检测不同温度条件下血浆内部实际的冷冻速度。结果显示:调节温度在90℃、100℃和120℃三种情况下,血小板在0℃以上、0℃、30℃、40℃、70℃等不同温度区域的实际降温速度与调节温度在80℃时的降温速度比较,差异有显著性(P<0.05)。虽然众多资料表明DMSO作冷冻保护剂,不控制降温速度,80℃冰箱冷冻保存血小板在临床应用中效果明显。同样也有报道80℃冷冻保存血小板融化复苏后有絮状聚集物或纤维蛋白析出等不稳定现象的发生。本研究显示,调节冰箱温度为80℃时,0℃以下冷冻保存血小板内部实际降温速度较慢,特别是关键的0℃和30℃~40℃的下降速度。而冰箱调节温度在90℃以下,冰冻保存血小板内部实际降温速度可以达到(1~3)℃/min。有报道血小板冷冻保存的冷却速度一般控制在(1~2)℃/min[4]。結合以上资料,笔者认为冰冻血小板内部实际降温速度是确保冷冻血小板稳定性的主要因素。确保冰冻血小板的稳定性,避免融化后纤维蛋白或絮状聚集物等不稳定性因素的产生,控制好血小板采集时间,加入DMSO的速度保持稳定,确认加药前血小板没有聚集现象都是必要的。在无速率降温仪的情况下,血小板冷冻保存在90℃~120℃可以确保冷冻血小板的稳定性。
参考文献
[1] 陈兴智,李聚林,张源,等.冰冻血小板的制备的稳定性研究.临床输血与检验,2007,1(10):4851.
[2] 丁国良,赵树华,王珍,等.冻存血小板中出现絮状物的原因分析.临床输血与检验,2004,6(2):114.
[3] 孙艳萍,袁媛,陈召江,等.冰冻血小板融化复苏后不可逆聚集的原因分析.临床输血与检验,2005,7(2): 8889.
[4] 王培华.输血技术学.人民卫生出版社,2002:76.