新疆野苹果瞬时遗传转化方法建立及初步验证

• 作 者: 李心悦 张克闯 张道远 李进 王玉成
• 机 构: 新疆师范大学,干旱区植物逆境生物学重点实验室,乌鲁木齐,830054;中国科学院新疆生态与地理研究所,中国科学院干旱区生物地理与生物资源重点实验室,乌鲁木齐,830011;中国科学院大学,北京1000
• 出 处: 分子植物育种
• 发表日期: 2018年22期
• 关键词: 瞬时转化 农杆菌侵染法 GUS基因 EsDREB2B基因 ScA LDH21基因

为了在家苹果祖先——新疆野苹果(Malus sieversii (Ledeb.) Roem.)中快速获得目标基因的表达,旨在建立一种高效的外源基因瞬时表达系统.本研究以木本植物新疆野苹果组培苗为转化材料,采用农杆菌侵染法,将携带pCAMBIA1301空载体的EHA105农杆菌菌株转化至野苹果植株,并进行了瞬时表达条件的研究,确立了转化菌液OD600为0.6,侵染时间为3.5 h的最优转化条件.在此最优条件下,将分别含有EsDREB2B和ScA LDH21外源基因的农杆菌菌株EHA105转化野苹果组培苗,经基因组DNA PCR电泳检测以及半定量RT-PCR电泳检测均证明已成功转化,且初步验证了这两种外源基因的耐盐功能.为后续抗逆相关基因的原位功能验证提供了基础,同时也为未来新疆野苹果抗逆基因的快速筛选鉴定提供了一定的技术支撑.