【摘 要】
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建立灵敏、可靠、稳定的柱前衍生化超快速液相色谱-串联质谱(ultra-fast liquid chromatography-mass spectrometry,UFLC-MS/MS)方法检测人血清中超微量雌酮、雌二醇和雌三醇
【机 构】
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南京工业大学药学院,江苏黄河药业股份有限公司
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建立灵敏、可靠、稳定的柱前衍生化超快速液相色谱-串联质谱(ultra-fast liquid chromatography-mass spectrometry,UFLC-MS/MS)方法检测人血清中超微量雌酮、雌二醇和雌三醇。方法:取200μL血清样品,采用两步液萃取法,通过丹磺酰氯衍生化后进行样品分析,以雌二醇-d3作为内标。采用Welch Ultimate UHPLC XB-C18色谱柱(2.1mm×50mm,1.8μm),乙腈-水(含0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速0.20mL/min,柱温40℃,进样量10μL。在电喷雾离子(electrospray ionization,ESI)源正离子模式下,选择多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式。经检测,雌酮、雌二醇、雌三醇及内标的检测离子对分别为:m/z为504.0→171.0、m/z为506.0→171.0、m/z为522.0→171.0和m/z为509.0→171.0。结果:丹磺酰氯衍生法可大幅度提高雌酮、雌二醇、雌三醇在ESI源下的离子化效率,血清中3种成分的线性范围均为0.01~5.00μg/L,定量下限均达到10ng/L,样品回收率50%以上,批内、批间准确度与精密度均小于15%,满足生物样品的分析要求。结论:该方法灵敏度高、重现性好,可以用于临床血清样品中雌激素水平的定量分析。
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