破囊壶菌△^4-脂肪酸脱饱和酶基因5’端侧翼区域的克隆与鉴定

• 作 者: 江贤章 陈金卿 田宝玉 高媛媛 舒正玉 李欣 蓝灿华 黄建忠
• 机 构: 福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心
• 出 处: 福建师范大学学报：自然科学版
• 发表日期: 2008年6期
• 关键词: 破囊壶菌 脱饱和酶 衔接头PCR 启动子 绿色荧光蛋白 Thraustochytrium desaturase link-adapter PCR p
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目（30370028）,福建省自然科学基金重大项目（2003F005）,福建省教育厅基金资助项目（JB07079）,福建省发改委重大项目（E20043477）,福建省科技厅重大项目（2005Q007）,福建省青年人才基金资助项目（2008F3036）.

应用衔接头PCR（LA-PCR）技术，扩增得到约1000bp的海洋破囊壶菌△^4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物。对该产物测序，经启动子软件与序列比对分析，发现该序列（Genkbank登录号EU074209）具有真核启动子序列的基本结构特征，含有TATA盒、CAAT盒、INR等元件。将扩增得到的脱饱和酶基因5’端侧翼序列亚克隆到含有绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的质粒pGlow-TOPO中，构建重组表达质粒，转化大肠杆菌细胞。荧光显微观察大肠杆菌阳性转化予发出荧光，侧翼序列合有启动子功能得到确认。