【摘 要】
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目的 初步探讨孕烷X受体(PXR)对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导肝细胞DNA损伤和坏死性凋亡的影响.方法 采用已构建的PXR高表达L02-PXR和空白载体对照L02-pB细胞;实时荧光定量PCR (qR
【机 构】
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广东省营养膳食与健康重点实验室,中山大学公共卫生学院,广东广州510080;厦门大学公共卫生学院,福建厦门361102
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目的 初步探讨孕烷X受体(PXR)对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导肝细胞DNA损伤和坏死性凋亡的影响.方法 采用已构建的PXR高表达L02-PXR和空白载体对照L02-pB细胞;实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测细胞NR1I2和CYP3A4 mRNA水平改变;蛋白免疫印迹(Western blotting)检测细胞内PXR和坏死性凋亡下游效应自噬分子LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白相对表达含量;双核微核试验(CBMN)检测细胞遗传损伤情况;采用噻唑蓝(MTT)法测定AFB1对细胞活性抑制影响;利用坏死性凋亡抑制剂Nec-1构建坏死性凋亡抑制的细胞模型,验证AFB1诱导的坏死性凋亡的效应.结果 与L02-pB细胞相比,L02-PXR细胞NR1I2 mRNA和PXR蛋白显著上调(均P＜0.001).AFB1显著地诱导L02-pB和L02-PXR细胞中CYP3A4 mRNA上调(均P＜0.05),在L02-PXR细胞中的效应更为明显.与对照组相比,AFB1在5～30 μmol/L呈剂量反应关系诱导L02-pB和L02-PXR细胞的微核率增高(均P＜0.05),L02-PXR细胞更为明显;同时,AFB1明显地诱导两株细胞的核芽率和核桥率,但随AFB1剂量增高都有下降趋势.细胞活性随AFB1浓度(1.875～120 μmol/L)增加呈剂量反应关系抑制(均P＜0.05);且相对于L02-pB细胞,L02-PXR细胞对AFB1处理48 h诱导的细胞活性抑制作用更为敏感(P＜0.05).Nec-1可显著性抑制AFB1诱导的L02-PXR细胞活性抑制率(P＜0.05),然而却不能降低AFB1诱导L02-pB细胞活性抑制率.此外,AFB1显著性诱导L02-pB和L02-PXR坏死性凋亡下游LC3-Ⅱ的上调(均P＜0.05);且与L02-pB细胞相比,Nec-1对AFB1诱导的L02-PXR细胞活性抑制和LC3-Ⅱ上调的抑制效果更为明显(P＜0.05).结论 PXR参与AFB1诱导人肝细胞DNA损伤介导的坏死性凋亡,与PXR促进AFB1诱导CYP3A4基因上调有关.
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