【摘 要】
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目的 对肺炎克雷伯茼所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-Iactamase,ESBLs)进行基因重组表达及纯化.方法 以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌总
【机 构】
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广州医学院第一附属医院输血科,广东,广州,510120;广州医学院第一附属医院检验科,广东,广州,510120
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目的 对肺炎克雷伯茼所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-Iactamase,ESBLs)进行基因重组表达及纯化.方法 以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌总基因组DNA为模板PCR扩增CTX-M-3,将其克隆入pET-28a(+)载体,重组质粒转入大肠埃希茼ER2566中表达,表达产物经过Ni-琼脂糖凝胶柱纯化,用SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定纯化蛋白.结果 PCR扩增出大小为876bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%.此基因能在大肠埃希菌ER2566中大量表达,蛋白分子质量大约为32KD得到SDS-PAGE电泳和Western-blot的证实,与理论值相符.结论 成功表达及纯化CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶,为进一步酶生物学特性及酶的抗体制备研究奠定了基础.
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