【摘 要】
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目的:构建雌激素受体(ERα)AF1区丝氨酸(Ser)磷酸化位点104、106、118和167位氨基酸的4个突变体,并在哺乳动物细胞293T中检测突变后对其活性的影响。方法:以pcDNA3-ERα为模
【机 构】
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军事医学科学院生物工程研究所,吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室,吉林大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室
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目的:构建雌激素受体(ERα)AF1区丝氨酸(Ser)磷酸化位点104、106、118和167位氨基酸的4个突变体,并在哺乳动物细胞293T中检测突变后对其活性的影响。方法:以pcDNA3-ERα为模板,用重组PCR的方法扩增出编码这4种突变体的基因片段,再将这些片段以正确相位与pcDNA3-FLAG载体中的FLAG编码序列融合。用Western blotting检测融合蛋白的表达,并在哺乳动物细胞293T中检测这些突变体突变后对ERα活性的影响。结果:成功构建了ERαAF1区丝氨酸磷酸化位点104、106、118和167位氨基酸的4个突变体,并在293T细胞中得到表达。活性测定结果表明,在不加雌激素(E2)的情况下,ERα及其突变体的转录活性分别是空载体pcDNA3的3.40、3.21、3.02、3.00和3.54倍;在雌激素的作用下,104、106位氨基酸的突变体对ERα的活性无影响,而118和167位氨基酸的突变体的活性值是ERα的50%。结论:在104、106、118和167这4个ERαAF1区磷酸化位点中,只有118和167位点的丝氨酸的磷酸化是雌激素调节靶基因转录过程中所必需的。
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