目的 检测survivin基因在卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞株SKOV3/ADM及其亲本细胞株SKOV3中的表达水平,探讨以survivin基因为靶向的RNA干扰(RNAi)能否有效沉默survivin基因在SKOV3/ADM细胞中的表达,并能否有效逆转SKOV3/ADM细胞对化疗药物的耐药性.方法半定量RT-PCR、免疫荧光法检测survivin mRNA、蛋白在SKOV3/ADM及SKOV3细胞中的表达.以survivin基因为靶向的重组质粒pshRNA-survivin及紫杉醇作用于SKOV3/ADM细胞,将SKOV3/ADM细胞分为4组,即对照组、RNAi组、紫杉醇组、RNAi+紫杉醇组,RT-PCR技术检测各组细胞的survivin mRNA表达水平,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法(TUNEL)检测各组细胞的凋亡情况.结果 survivin mRNA在SKOV3/ADM、SKOV3细胞中的表达水平分别为99.1%、75.3%,SKOV3/ADM、SKOV3细胞的荧光细胞数分别为(59±5)、(42±3)个,两种细胞间比较,差异均有统计学意义(P<0.05).RNAi后SKOV3/ADM细胞中 mRNA的表达水平由99.1%降低至7.9%.AO/EB荧光染色法、TUNEL法检测各组细胞凋亡数,紫杉醇组为(10.2±1.0)、(9.8±0.8)个,RNAi组为(48.5±4.9)、(49.5±4.3)个,RNAi+紫杉醇组为(71.5±6.8)、(68.3±5.7)个,RNAi+紫杉醇组与RNAi组比较,差异有统计学意义(P<0.05),RNAi+紫杉醇组与紫杉醇组比较,差异也有统计学意义(P<0.05).结论 survivin基因在SKOV3/ADM细胞中的表达显著高于SKOV3细胞.以survivin基因为靶向的RNAi可有效抑制SKOV3/ADM细胞中survivin基因的表达,有效增加了SKOV3/ADM细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性,显著上调了SKOV3/ADM细胞的凋亡活性。
RNA干扰技术沉默survivin基因逆转卵巢癌细胞株SKOV3/ADM耐药性的研究
【摘 要】
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目的 检测survivin基因在卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞株SKOV3/ADM及其亲本细胞株SKOV3中的表达水平,探讨以survivin基因为靶向的RNA干扰(RNAi)能否有效沉默survivin基因在SKOV3/ADM细胞中的表达,并能否有效逆转SKOV3/ADM细胞对化疗药物的耐药性.方法半定量RT-PCR、免疫荧光法检测survivin mRNA、蛋白在SKOV3/ADM及SKOV3
【机 构】
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400010,重庆医科大学附属第二医院妇产科,400010,重庆医科大学附属第二医院妇产科,四川省中医药研究院附属医院急诊科,400010,重庆医科大学附属第二医院妇产科,400010,重庆医科大学附
【发表日期】
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2005年40期
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