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目的本研究观察肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)对体外培养的恒河猴脉络膜/视网膜内皮细胞(RF/6A)表达自噬蛋白Beclin-1及细胞增殖、迁移和管腔形成的影响,探讨TNF-α参与新生血管生成的可能机制。方法将生长良好的RF/6A细胞随机分为空白对照组、TNF-α组和TNF-α+3-MA组。培养24 h、48 h后采用Western blot检测细胞Beclin-1蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,细胞划痕法检测细胞迁移,Matrigel法检测管腔形成。结果培养24 h和48 h,各组Beclin-1/β-actin比值分别是TNF-α组(24 h)0.673±0.017、TNF-α+3-MA组(24 h)0.491±0.017、TNF-α组(48 h)0.792±0.006、TNF-α+3-MA组(48 h)0.504±0.007、空白对照组0.268±0.017。TNF-α组RF/6A细胞Beclin-1的表达量均明显高于空白对照组(P<0.05),TNF-α+3-MA组Beclin-1的表达量较TNF-α组明显减少(P<0.05)。各组细胞的相对增殖率分别是TNF-α组(24 h)1.410±0.010、TNF-α+3-MA组(24 h)1.290±0.004、TNF-α组(48 h)1.320±0.011、TNF-α+3-MA组(48 h)0.180±0.015、对照组(24 h)1.000±0.020、对照组(48 h)1.000±0.011;TNF-α组细胞的相对增殖率均较空白对照组升高(P<0.05),3-MA预处理后,TNF-α促进RF/6A细胞增殖的能力在两个时间点均受到抑制(均为P<0.05)。各组细胞的相对迁移距离分别是TNF-α组(24 h)(345±28)μm、TNF-α+3-MA组(24 h)(259±77)μm、TNF-α组(48 h)(762±55)μm、TNF-α+3-MA组(48 h)(659±48)μm、空白对照组(24 h)(195±63)μm、空白对照组(48 h)(412±94)μm;TNF-α处理组RF/6A细胞24 h的迁移明显强于对照组(P<0.05),加入3-MA预处理后,这种增强作用有所下降,但仍然明显高于对照组(P<0.05);培养48 h,更多细胞迁移入划痕区域,较24 h明显增加;不同组之间的差异与24 h时的结果类似,差异有统计学意义(P<0.05);培养24 h各组细胞管腔形成个数:TNF-α组(11.80±0.81)个、TNF-α+3-MA组(7.50±0.72)个、空白对照组(4.30±1.12)个,TNF-α组及TNF-α+3-MA组管腔形成个数均高于对照组(均为P<0.05),TNF-α+3-MA组较TNF-α组明显减少(P<0.05)。结论 TNF-α能够促进RF/6A细胞的增殖、迁移和管腔样结构的形成,且TNF-α促进内皮细胞自噬在血管新生中发挥重要的调控作用。