【摘 要】
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目的 观察Toll样受体(TLR)不同亚型对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨的影响.方法 分离纯化SD大鼠BMSCs,传代扩增.免疫荧光分析检测CD44、CD105、波动蛋白(Vimentin),流式细胞术检测CD34、CD14、CD29、CD95、CD44和人白细胞抗原(HLA)-Ⅰ等标志物.将第3代细胞,随机分为空白组、TLR-3激活组和TLR-4激活组.后两组分别以聚肌胞苷酸Poly(
【机 构】
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目的 观察Toll样受体(TLR)不同亚型对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨的影响.方法 分离纯化SD大鼠BMSCs,传代扩增.免疫荧光分析检测CD44、CD105、波动蛋白(Vimentin),流式细胞术检测CD34、CD14、CD29、CD95、CD44和人白细胞抗原(HLA)-Ⅰ等标志物.将第3代细胞,随机分为空白组、TLR-3激活组和TLR-4激活组.后两组分别以聚肌胞苷酸Poly(I∶C),1 mg/L)和脂多糖(LPS,10 μg/L)激活.成骨诱导培养液培养.Western blot法检测Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ)和骨钙素(Osteocalcin)的表达,并定量分析.在培养的第10、14天进行碱性磷酸酶(ALP)及茜素红染色.结果 全骨髓培养法提取到BMSCs,免疫荧光显示CD44、CD105、Vimentin阳性.流式细胞术显示CD29、CD95、CD44、HLA-Ⅰ阳性,CD14、CD34阴性.Collagen-Ⅰ和Osteocalcin的蛋白表达量依次为,TLR-4激活组>TLR-3激活组>空白组.3组ALP染色及茜素红染色均呈阳性,TLR-3激活组染色程度最强,空白组和TLR-4染色程度无明显差异.结论 TLR-3和TLR-4均能促进大鼠BMSC向成骨细胞(OB)分化.TLR-4作用更明显.在OB矿化过程中,TLR-3起促进作用,TLR-4则起抑制作用。
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