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目的 了解问号钩端螺旋体(简称钩体)鞭毛相关Ⅲ型分泌系统fliN基因产物的致病性.方法 构建基因打靶载体p2NILfliN-amp,采用基于自杀质粒与染色体同源序列重组的靶基因敲除技术构建不表达FliN的问号钩体赖型56601株突变株,采用PCR、测序和Western blot对FliN-突变株进行鉴定.采用动力试验、MTT、Fontana镀银染色法和流式细胞术,对FliN-突变株的迁移能力、培养物上清对小鼠单核-巨噬样细胞株J774A.1的细胞毒性、黏附及诱导J774A.1细胞凋亡能力的改变进行分析.结果 PCR、测序和Western blot结果均证实成功构建了FliN-突变株,该突变株能在含100μg/ml氨苄青霉素的Korthof培养基中生长及繁殖.FliN-突变株在Korthof半固体培养基上菌落直径(2～3 mm)明显小于野生株(6～8 mm),表明该突变株动力消失.FliN-突变株培养物上清作用J774A.1细胞72 h时虽显示有细胞毒性,但明显低于野生株(P＜0.05).FliN-突变株作用J774A.1细胞60 min时的黏附率(25.5%)明显低于野生株(47.5%)(P＜0.05),其引起J774A.1细胞坏死和细胞凋亡率(30.6%和22.7%)也明显低于野生株(48.2%和35.2%)(P＜0.05).结论 fliN基因产物与问号钩体黏附细胞、分泌毒力因子和诱导细胞凋亡密切相关.采用基于自杀质粒基因敲除技术可用于研究问号钩体靶基因产物的致病机制。