【摘 要】
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目的:高效真核表达和纯化获得CD3E蛋白,制备全人源CD3抗体.方法:构建CD3E链胞外区真核表达质粒,利用293F悬浮细胞表达系统表达并纯化获得高纯度蛋白.选取人源化抗体转基因小
【机 构】
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重庆市畜牧科学院,重庆市医用动物资源的开发与利用工程技术研究中心,重庆 402460
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目的:高效真核表达和纯化获得CD3E蛋白,制备全人源CD3抗体.方法:构建CD3E链胞外区真核表达质粒,利用293F悬浮细胞表达系统表达并纯化获得高纯度蛋白.选取人源化抗体转基因小鼠CAMouse-HG76进行免疫,通过细胞融合的方法获得杂交瘤细胞,再利用ELISA法和流式细胞分析法筛选CD3特异性单克隆抗体.结果:成功构建重组表达载体pcDNA3.4-CD3E-mFc,真核细胞表达并纯化获得纯度为85%的融合蛋白.免疫小鼠后效价高达1:102400.杂交瘤细胞筛选获得3株CD3特异性单克隆抗体.结论:本研究成功获得了CD3E融合蛋白和CD3单克隆抗体,为后续建立ELISA检测方法、全人源治疗性抗体药物及相关研究提供基础.
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