论文部分内容阅读
为建立检测非洲猪瘟病毒（ASFV）的血清学检测方法，本研究合成ASFVp72全长基因并将其克隆至pGEX6p-1载体，构建重组质粒pGEX6p-1-p72。通过测序鉴定正确后转化BL21感受态，经IPTG诱导表达，并利用GST亲和纯化层析柱进行纯化，得到p72重组蛋白。以p72蛋白作为包被抗原，通过优化各反应条件建立检测猪血清中非洲猪瘟抗体的间接ELISA方法。结果显示，经SDS-PAGE和Western-blot鉴定后获得了可溶性表达及纯度较高的重组p72蛋白。经条件优化确定最佳包被浓度为1.25μg/mL，封闭时间为37℃1h；待检血清稀释浓度为1:200，孵育时间为37℃30min；羊抗猪IgG-HRP二抗孵育时间为37℃1h。通过检测结果显示批内和批间的变异系数均<10%、阳性对照血清的稀释度为1:3200倍时OD450nm值仍大于临界值、对不同病毒抗体阳性血清检测均不发生交叉反应。以上结果表明本研究建立的非洲猪瘟抗体间接ELISA检测方法具有很好的重复性、敏感性和特异性。为临床样品猪血清ASFV抗体的检测提供了一种快速、精准、经济、高效的方法。