【摘 要】
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目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制p21表达对低浓度过氧化氢(H2O2)诱导的黑素细胞提前衰老的影响,以及黑素细胞提前衰老与黑素传递功能间的关系.方法:p21 siRNA序列转染黑素细胞
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院皮肤科,江苏南京,210029;南京医科大学附属妇产医院皮肤科,江苏南京,210004
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目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制p21表达对低浓度过氧化氢(H2O2)诱导的黑素细胞提前衰老的影响,以及黑素细胞提前衰老与黑素传递功能间的关系.方法:p21 siRNA序列转染黑素细胞,采用荧光显微镜、实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及western blot检测抑制效率.将正常人黑素细胞分为对照组(阴性siRNA转染处理)、p21 siRNA组(p21 siRNA转染处理)、阴性siRNA+H2O2组(阴性siRNA转染24h后加入400 μmol/L H2O2处理)及p21 siRNA+H2O2组(p21 siRNA转染24 h后加入400 μmol/L H2O2处理).采用β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老;EdU细胞增殖检测细胞增殖能力;western blot检测各组p21和树突调节蛋白[RhoA、Rac1及细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)]表达;免疫荧光检测细胞骨架蛋白和黑素小体分布.结果:p21siRNA转染黑素细胞后明显抑制p21 mRNA和蛋白表达(P＜0.05).与阴性siRNA+H2O2组比较,p21 siRNA+H2O2组β-半乳糖苷酶染色阳性率降低、细胞增殖能力增加及p21蛋白表达降低(P＜0.05).与对照组比较,阴性siRNA+H2O2组树突负性调节因子RhoA蛋白表达升高,而正性调节因子Rac1及Cdc42蛋白表达均降低,且细胞骨架蛋白及黑素小体荧光强度均降低(P＜0.05).经p21siRNA预处理后,p21 siRNA+H2O2组较阴性siRNA+H2O2组RhoA蛋白表达降低,Rac1和Cdc42蛋白表达均增高,且细胞骨架蛋白及黑素小体荧光强度均增高(P＜0.05).结论:低浓度H2O2诱导提前衰老的黑素细胞存在黑素传递功能障碍,p21 siRNA可改善低浓度H2O2诱导的黑素细胞提前衰老以及受损的黑素传递功能.
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