【摘 要】
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目的 C1GALT1已被报道在多种癌症中呈现高表达,miR-199b-5p对肿瘤的发生有抑制作用,但在胃癌中的作用机制尚不明确.文章旨在探讨miR-199b-5p通过调控C1GALT1对胃癌BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭影响.方法 利用生物信息学分析C1GALT1在胃癌中的表达情况.细胞进行分组①SiRNA转染:空白对照组1、Si-NC组、Si组(3、5、8μM);②双荧光素酶实验分组:MI-NC+h-C1GALT1-3UTR-wt组、MI+h-C1GALT1-3UTR-wt组、MI-NC+h-C1G
【机 构】
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421001 衡阳,南华大学衡阳医学院/湖南省重点实验室/肿瘤研究所;421001 衡阳,湖南环境生物职业技术学院护理学院
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目的 C1GALT1已被报道在多种癌症中呈现高表达,miR-199b-5p对肿瘤的发生有抑制作用,但在胃癌中的作用机制尚不明确.文章旨在探讨miR-199b-5p通过调控C1GALT1对胃癌BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭影响.方法 利用生物信息学分析C1GALT1在胃癌中的表达情况.细胞进行分组①SiRNA转染:空白对照组1、Si-NC组、Si组(3、5、8μM);②双荧光素酶实验分组:MI-NC+h-C1GALT1-3UTR-wt组、MI+h-C1GALT1-3UTR-wt组、MI-NC+h-C1GALT1-3UTR-mu组、MI+h-C1GALT1-3UTR-mu组;③miRNA转染:MI组、MI-NC组、空白对照组2;IN组、IN-NC组,空白对照组3;④共转染:空载体组、Si-C1GALT1组、Si-C1GALT1+miR-199b-5p inhibitor.Western blot检测SiRNA抑制C1GALT1的表达,CCK8法、细胞划痕和Transwell实验分别检测SiRNA干扰C1GALT1对胃癌BGC-823细胞的增殖、迁移和侵袭能力.预测能与其存在负向调控的miRNAs,双荧光素酶报告基因实验验证C1GALT1与miR-199b-5p之间的靶向关系.转染miR-199b-5pmimics/inhibitor后用Western blot检测转染后C1GALT1的表达情况,CCK8法、细胞划痕和Transwell实验分别检测miR-199b-5p对胃癌BGC823细胞的增殖、迁移和侵袭能力.通过Si-C1GALT1和miR-199b-5p inhibitor共转染检测其对胃癌BGC-823细胞的增殖、迁移和侵袭能力影响.结果 生物信息学提示C1GALT1在胃癌中存在高表达,通过SiRNA抑制C1GALT1表达后,发现C1GALT1低表达会使胃癌BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭能力[(0.270±0.005)％、(534.0±24.1)个、(156.0±42.5)个]低于空白对照组1[(0.519±0.012)％、(783.0±12.8)个、(460.0±19.4)个]与Si-NC组[(0.523±0.001)％、(744.0±8.6)个、(477.0±26.9)个],差异具有统计学意义(P<0.05).双荧光素报告显示,miR-199b-5p能靶向结合C1GALT1.miR-199b-5p mimics降低BGC-823细胞中C1GALT1表达水平(P<0.01);miR-199b-5p inhibitor提高BGC-823细胞中C1GALT1表达水平(P<0.05).miR-199b-5p mimics组BGC-823细胞的增殖,迁移和侵袭能力[(0.256±0.002)％、(145±5.7)个、(368±57.6)个]与空白对照组2[(0.529±0.003)％、(651.0±35.7)个、(668.0±21.5)个]和miR-199b-5p mimic NC组[(0.514±0.004)％、(641.0±17.3)个、(662.0±36.1)个]相比均降低(P<0.05);miR-199b-5p inhibitor组BGC-823细胞的增殖,迁移和侵袭能力[(0.984±0.001)％、(1089.0±114.4)个、(894.0±15.4)个]与空白对照组3[(0.529±0.003)％、(651.0±35.7)个、(668.0±21.5)个]和miR-199b-5p inhibitor NC[(0.532±0.011)％、(630.0±17.7)个、(672.0±48.5)个]相比均提高(P<0.05).Si-C1GALT1和miR-199b-5p inhibitor共转染可部分逆转Si-C1GALT1对胃癌BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭抑制作用.结论 miR-199b-5p可能通过调控C1GALT1抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,迁移和侵袭.
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