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光学二次谐波成像技术由于具有三维高分辨率、不需要荧光标记、对生物样品的杀伤效应小等特点，在生物医学研究上具有广阔的应用前景．在双光子荧光成像基础上，实现了适合对厚组织样品观测的背向光学二次谐波成像，探讨了背向二次谐波成像的特点和影响因素．通过对多种生物组织样品进行大量实验，发现胶原纤维和肌肉纤维均可以产生很强的背向二次谐波，并成功地将背向二次谐波成像技术应用于糖尿病患者皮肤的观测．背向二次谐波成像技术可望推广到病理检查等临床应用中。