降钙素基因相关肽和受体活性修饰蛋白1对血管平滑肌细胞迁移的影响及机制

• 作 者: 龙仙萍 崔璨 陈攀科 汪松 王冬梅 许官学 姚小剑 石蓓
• 机 构: 563003 遵义医学院第一附属医院心内科,563003 遵义医学院第一附属医院心内科,563003 遵义医学院第一附属医院心内科,563003 遵义医学院第一附属医院急诊科,563003 遵义医学院
• 出 处: 中华心血管病杂志
• 发表日期: 2015年43期
• 关键词: 降钙素基因相关肽 肌细胞 平滑肌 干细胞

目的

探讨转染降钙素基因相关肽(CGRP)的骨髓间充质干细胞(MSC)对血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的影响，及活性修饰蛋白1(RAMP1)在其中的作用和机制。

方法

分离、培养大鼠MSC和VSMC，分别应用携带CGRP和RAMP1的慢病毒载体转染MSC和VSMC，然后将MSC与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的VSMC共培养。实验分为5组：(1)AngⅡ对照组(MSC＋VSMC＋AngⅡ)；(2)MSC^CGRP＋组(MSC^CGRP＋＋VSMC＋AngⅡ)；(3)MSC^CGRP＋RAMP1^–组(MSC^CGRP＋＋VSMC^RAMP1-＋AngⅡ)；(4)MSC^CGRP＋RAMP1^＋组：(MSC^CGRP＋＋VSMCRAMP1^＋＋AngⅡ)；(5)RAMP1^＋(MSC＋VSMCRAMP1^＋＋ AngⅡ)。应用Transwell实验评价VSMC的迁移能力，Western blot检测蛋白的表达水平。

结果

Transwell实验结果显示，MSC^CGRP＋组VSMC迁移数量[(50.8±2.6)个]少于AngⅡ对照组[(71.4±2.3)个]，而多于MSC^CGRP＋RAMP1^＋组[(30.4±3.0)个](P均<0.05)；MSC^CGRP＋RAMP1^–组VSMC迁移数量[(69.0±5.6)个]多于MSC^CGRP＋RAMP1^＋组(P<0.05)，而与AngⅡ对照组差异无统计学意义(P>0.05)；RAMP1^＋组VSMC迁移数量[(71.6±3.4)个]与AngⅡ对照组差异也无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示，MSC^CGRP＋组磷酸化核因子–κB P65(P–P65)蛋白表达水平低于AngⅡ对照组(0.475±0.022比0.642±0.035，P<0.05)；MSC^CGRP＋RAMP1^–组P–P65蛋白表达水平高于MSC^CGRP＋RAMP1^＋组(0.670±0.030比0.373±0.041，P<0.05)，而与AngⅡ对照组差异无统计学意义(P>0.05)；RAMP1^＋组P–P65蛋白表达量(0.643±0.039)与AngⅡ对照组比较差异也无统计学意义(P>0.05)。

结论

RAMP1对CGRP抑制VSMC迁移起促进作用，RAMP1–CGRP通过核因子–κB信号通路抑制VSMC迁移。