肝星状细胞来源外泌体不同提取方法的比较

• 作 者: 黄小莉 刘莹莹 丛敏 李长英 王晓凡 刘琳 刘天会 王萍 王
• 机 构: 首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心/肝硬化转化医学北京市重点实验室暨国家消化系统疾病临床医学研究中心,首都医科大学基础医学院细胞生物学系/肝脏保护与再生调节北京市重点实验室,国家纳米科学中心/中国科
• 出 处: 临床和实验医学杂志
• 发表日期: 2020年7期
• 关键词: 肝星状细胞 外泌体 超速离心 排阻超滤组合 Hepatic stellate cellExosomeUltracentrifugationFiltration
• 基金项目: 国家自然科学基金(编号:81570542),中国科学院纳米生物效应与安全性重点实验室开放课题资助项目(编号:NSKF201808)

目的采用超速离心法(UC)和优化后的排阻超滤组合法提取肝星状细胞(HSC)来源外泌体,比较两种提取方法所得外泌体的纯度、浓度和总蛋白量。方法分别用UC法和优化后的排阻超滤组合法提取HSC来源外泌体。使用透射电镜观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)检测外泌体浓度及大小,二喹啉甲酸(BCA)试剂盒检测外泌体总蛋白浓度,Western blotting法检测外泌体表面标志物肿瘤易感基因101蛋白(TSG101)、分化抗原9(CD9)的表达。结果两种方法均可得到圆盘形的30~150 nm膜性囊泡。优化后