【摘 要】
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为果蔬斯高维尔炭疽菌检测提供高效便捷、特异性好、可视化的检测方法,以果蔬斯高维尔炭疽菌内部转录间隔区ITS序列为靶基因,设计4条LAMP引物和1条环引物,通过对引物比例、反应时间、反应体系等条件的选择,建立对果蔬斯高维尔炭疽菌具有特异性扩增的LAMP检测方法.特异性试验结果显示:所建立的LAMP反应体系在最佳反应温度65℃条件下扩增60 min,以果蔬斯高维尔炭疽菌DNA为模板的反应体系在指示剂钙黄绿素和羟基萘酚蓝的作用下,分别呈现绿色和蓝色,反应结果为阳性,扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳检测呈梯形条带;而
【机 构】
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贵州大学 作物保护研究所,贵州 贵阳550025;贵州大学 农学院,贵州 贵阳550025;贵州大学 农学院,贵州 贵阳550025
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为果蔬斯高维尔炭疽菌检测提供高效便捷、特异性好、可视化的检测方法,以果蔬斯高维尔炭疽菌内部转录间隔区ITS序列为靶基因,设计4条LAMP引物和1条环引物,通过对引物比例、反应时间、反应体系等条件的选择,建立对果蔬斯高维尔炭疽菌具有特异性扩增的LAMP检测方法.特异性试验结果显示:所建立的LAMP反应体系在最佳反应温度65℃条件下扩增60 min,以果蔬斯高维尔炭疽菌DNA为模板的反应体系在指示剂钙黄绿素和羟基萘酚蓝的作用下,分别呈现绿色和蓝色,反应结果为阳性,扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳检测呈梯形条带;而以其他8株对照菌株DNA为模板的反应体系和空白对照分别呈现橘黄色和紫色,均为阴性反应,无扩增条带出现,表明该LAMP检测方法对果蔬斯高维尔炭疽菌特异性强.
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