【摘 要】
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目的借助微流控蛋白印迹实验实现对目的蛋白省时、省力和省试剂的定性以及相对定量分析。方法选取O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白为目的蛋白,选用高表达MGMT蛋白的MC
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病原学系,中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所生物化学与分子生物学系
【基金项目】
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国家自然科学基金(81272230;81550030)
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目的借助微流控蛋白印迹实验实现对目的蛋白省时、省力和省试剂的定性以及相对定量分析。方法选取O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白为目的蛋白,选用高表达MGMT蛋白的MCF7细胞为细胞模型,用传统蛋白印迹杂交和纸芯片蛋白印迹杂交实验法对经过药物MGMT阻断剂(lomeguatrib)处理后MCF7细胞的MGMT蛋白表达量做定性以及相对定量分析。结果纸芯片蛋白印迹杂交可以成功进行MGMT的定性、相对定量分析,而且上样检测量可低至10~25 pg。这相比于传统Western blot的上样检测蛋白检测限1~5 ng,提高了3个数量级。整个操作流程只需要1 h,所用试剂量少,实验成本更低。而且,纸芯片的多通道构造可以实现如同反向蛋白杂交分析(RPPA)一样的,对组织蛋白表达量进行高通量的系统检测。结论微流控蛋白印迹杂交相较于传统Western blot可以检测到更微量级的蛋白,节省试剂和样品,省时和省力,并可进行高通量的定性以及相对定量分析。
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