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采用添加亚硫酸钠、乙醇，以及超声波和微波等对大豆分离蛋白（Soybean protein isolate, SPI）进行理化预处理，研究其溶解性、结构等变化，以及对谷氨酰胺转氨酶（Transglutaminase, TG）聚合形成凝胶特性的影响。结果表明，亚硫酸钠、乙醇、超声波和微波预处理都可以提高SPI蛋白溶解性，减小颗粒平均粒径，以微波预处理提高效果最明显。超声波、微波、亚硫酸钠预处理显著提高SPI蛋白游离巯基含量，以亚硫酸钠预处理提高效果最好。除乙醇预处理外，其它预处理均使SPI蛋白表面疏水性明显增强，效果依次为微波、超声波、亚硫酸钠。乙醇预处理使氢键作用显著增强，亚硫酸钠、超声波和微波预处理均不同程度减小了疏水相互作用。超声波、微波预处理使SPI蛋白α-螺旋含量降低，无规则卷曲含量升高。在上述预处理后加入TG酶，可促进SPI蛋白形成均匀、致密的凝胶，以微波预处理效果最好，此时凝胶强度达到278.33 g/cm2，持水率达到96%。