【摘 要】
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目的 评价降落聚合酶链反应(touchdown PCR,TD-PCR)检测肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)的效能和敏感性.方法 根据touchdown原理设计TD-PCR程序,试验选择PCR最佳反应条件,
【机 构】
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南方医科大学流行病学系,广州,510515;广州军区空军后勤部,广州,510620
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目的 评价降落聚合酶链反应(touchdown PCR,TD-PCR)检测肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)的效能和敏感性.方法 根据touchdown原理设计TD-PCR程序,试验选择PCR最佳反应条件,分别与普通PCR及TD-PCR、普通Taq酶与热启动酶扩增效果进行比较,并利用10倍稀释法检验了TD-PCR方法的灵敏度.琼脂糖凝胶电泳验证扩增产物,纯化后DNA产物测序验证该方法的特异性.结果 TD-PCR的扩增片段条带清晰,检测效果明显优于普通PCR,使用普通Taq酶的TD-PCR比使用热启动酶有更优的性价比,测序证实了此组片段的特异性,cDNA的最低检测浓度为1.03.μg/mL.结论 成功建立TD-PCR检测EV71的方法,使用普通Taq酶获得理想的检测结果,为快速检测手足口病的病原体提供了可靠的手段.
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