【摘 要】
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目的:制备抗人KIAA0100蛋白多克隆抗体,为今后研究人KIAA0100蛋白的结构和功能奠定基础.方法:采用生物信息学软件对人KIAA0100蛋白第1 557～2 234位氨基酸序列进行原核密码子优
【机 构】
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西安交通大学第二附属医院血液内科,陕西西安,710061
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目的:制备抗人KIAA0100蛋白多克隆抗体,为今后研究人KIAA0100蛋白的结构和功能奠定基础.方法:采用生物信息学软件对人KIAA0100蛋白第1 557～2 234位氨基酸序列进行原核密码子优化,将优化后的核苷酸序列经人工合成后克隆入原核表达载体pET-30a中,构建重组质粒;采用限制性酶切分析对重组质粒进行鉴定;将正确的重组质粒转化人大肠杆菌BL21(DE3)细胞,以表达羧基末端携带6×组氨酸标签的重组蛋白;使用重组蛋白作为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗人KIAA0100蛋白多克隆抗体;使用蛋白质印迹分析检测该多克隆抗体对人KIAA0100蛋白的识别能力.结果:限制性酶切分析显示:重组质粒被成功构建;SDS-PAGE分析结果显示:主要以包涵体形式存在的重组蛋白被成功表达;蛋白质印迹分析证实:该多克隆抗体能够高效地识别人KIAA0100蛋白.结论:成功制备了抗人KIAA0100蛋白多克隆抗体,以上研究结果为我们将来研究人KIAA0100蛋白的结构和功能奠定了基础.
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