【摘 要】
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[目的] 利用聚合酶链反应(PCR)技术对Wilson病(WD)基因进行体外定点突变的研究.[方法] 采用PCR定点突变技术,首先设计两对引物,将突变位点设计在引物上,通过重叠延伸法两次PC
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[目的] 利用聚合酶链反应(PCR)技术对Wilson病(WD)基因进行体外定点突变的研究.[方法] 采用PCR定点突变技术,首先设计两对引物,将突变位点设计在引物上,通过重叠延伸法两次PCR扩增,扩增片段上含有所需要的突变位点,最后将扩增片段克隆入pRc/CMV载体中.[结果] DNA测序表明在预期位点已经发生突变,WD基因第778位密码子由精氨酸(Arg)残基突变为亮氨酸残基(Leu),用PCR定点突变技术成功构建Wilson病基因突变体.[结论] PCR技术诱导定点突变准确、高效.Wilson病基因突变体的构建成功,为进一步研究该突变位点导致Wilson病的发病机制和Wilson病蛋白的结构和功能的关系奠定了基础.
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