PTHrP基因靶向RNA干扰重组表达质粒的构建鉴定以及在HTB-94细胞中的功能检测

• 作 者: 秦宏敏 韩会峰 沙广钊
• 机 构: 徐州医学院附属医院创伤骨科,江苏邳州第一人民医院
• 出 处: 中国骨与关节损伤杂志
• 发表日期: 2008年7期
• 关键词: siRNA(PTHrp)质粒构建 RNA干扰 PTHrp蛋白和mRNA表达
• 基金项目: 江苏省自然科学基金(05KJB320135);江苏省高校自然科学研究基金资助项目(BK2005015)

目的构建针对目的基因PTHrp的pSilencer3．1-H1 neo siRNA（small interfering RNA）表达质粒，并在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中观察其干扰效果。方法设计并合成针对PTHrP基因编码区的含有发卡结构的互补的寡核苷酸链，体外退火后克隆入经B amH I，Hind Ⅲ双酶切线性化的干扰载体pSilencerTM3．1H1 neo中，对重组质粒进行酶切分析和DNA系列测定。结果双酶切证实PTHrP siRNA表达质粒克隆构建成功，插入片段测序结果与合成的siRNA结果一