靶向表皮生长因子受体的shRNA抑制U251胶质瘤生长的实验研究

• 作 者: 康春生 浦佩玉 张志勇 王广秀 贾志凡 裘明哲 周宏旭 于士柱
• 机 构: 300052,天津医科大学总医院神经外科,天津市神经病学研究所神经肿瘤实验适,300052,天津医科大学总医院神经外科,天津市神经病学研究所神经肿瘤实验适,300052,天津医科大学总医院神经外科,天
• 出 处: 中华神经外科杂志
• 发表日期: 2007年23期
• 关键词: 表皮生长因子受体 短发夹RNA 神经胶质瘤 增殖

目的 探讨靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的RNA干涉(RNAi)技术抑制恶性胶质瘤体外细胞系U251的EGFR表达后,在体内外对U251细胞生长抑制作用.方法 在人EGFR开放阅读框的细胞内区酪氨酸激酶结构域选择1个siRNA靶序列、进行短发夹RNA(shRNA)表达载体psiRNA-2400的构建,并以含有随机序列的psiRNA-scr表达质粒为对照进行了脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞系表达.应用RT-PCR检测EGFR表达水平,应用MTT法、流式细胞术和Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转染前后的生物学行为.进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导shRNA基因治疗对U251细胞生长抑制作用.对肿瘤组织应用免疫组化的方法进行EGFR、PCNA和GFAP表达比较.结果 脂质体介导、靶向EGFR的shRNA可显著抑制U251细胞ECFR表达,MTF法分析显示psiRNA-2400转染组细胞生长抑制率为68%;与对照组和psiRNA-scr转染组比较,细胞周期分析结果表明psiRNA-2400转染组G0～G1期细胞数没有明显变化,进入S期的细胞数较对照组减少了12.7%～13%,而进入C2期细胞则增加了10.5%～11.7%.Matrigel基质生长实验显示对照组和psiRNA-scr转染组细胞呈正常形态贴壁生长,而psiRNA-2400转染组细胞不能贴壁生长,呈团块状簇集生长.裸鼠皮下荷瘤模型实验显示psiRNA-2400显著抑制皮下肿瘤生长,组织病理学分析显示治疗组EGFR表达下降、PCNA标记指数降低而GFAP表达上调.结论 靶向EGFR的RNAi技术可以显著抑制U251细胞的EGFR表达,在体内外对U251细胞生长均产生明显抑制作用.因此,shRNA表达质粒介导的基因治疗可以成为胶质瘤靶向性EGFR治疗的新策略。