利用TALENs技术建立基因定点修饰的猪Oct-4-EGFP细胞系

• 作 者: 刘畅 冯冲 宋志强 李西睿 王宁 储明星 潘登科
• 机 构: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,东北农业大学动物医学学院
• 出 处: 中国畜牧兽医
• 发表日期: 2013年11期
• 关键词: Oct-4-EGFP TALENs 同源重组 猪 干细胞 多能性 Oct-4-EGFP TALENs homologous recombination pig
• 基金项目: 国家自然科学基金面上项目（30972095）,中央级公益性科研院所基本科研业务费项目（2011cj-10-2）.

本研究旨在建立一个用于干细胞示踪的报告体系，将EGFPcDNA及两侧带有LoxP位点的neo抗性基因插入五指山小型猪内源性Oct-4基因的终止密码子处，以Oct-4基因完整的51调控区启动EGFP的表达，为猪干细胞研究提供有价值的工具。试验定制了针对猪Oct-4终止密码子的TALENs，与打靶载体共转染猪耳成纤维细胞，药物筛选得到抗性克隆点514个，经过PCR鉴定，共获得杂合阳性克隆点36个，打靶效率分别为5．6％和13．0％。本研究成功获得了Oct-4-EGFP转基因细咆系，并证明了TALENs技术可以