【摘 要】
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目的 探讨RNA干扰Twist基因表达对肝细胞癌细胞(HCC9402)转移的抑制作用.方法 用脂质体转染法将表达siPNA-Twist的真核表达载体pGenesil-1-Twist-siPNA(pTwist-siRNA)和空载
【机 构】
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江苏省苏州市横泾医院,215009苏州大学附属第一医院,215006;
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目的 探讨RNA干扰Twist基因表达对肝细胞癌细胞(HCC9402)转移的抑制作用.方法 用脂质体转染法将表达siPNA-Twist的真核表达载体pGenesil-1-Twist-siPNA(pTwist-siRNA)和空载体pGenesil-1-Neg-siRNA(pNeg-siRNA)导入HCC9402细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.观察siRNA-Twist对Twist表达的沉默及对肝细胞癌细胞体外侵袭转移的抑制作用,采用RT-PCR技术检测不同处理组细胞中Twist mRNA的表达水平,Western-blot测定蛋白表达水平.建立不同组裸鼠原位肝细胞肝癌模型,观察Twist沉默对裸鼠原位肝细胞肝癌转移的抑制作用.结果 pTwist-siRNA组胞内Twist mRNA及Twist蛋白的表达被有效沉默.重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭实验显示,pTwist-siENA组、空白对照组、pNeg-sigNA组穿透基底膜细胞数分别为(35±10)、(219±72)、(228±71)个/高倍镜(×200),前组明显低于后两组,差异分别有统计学意义(P<0.05).裸鼠体内实验表明.pTwist-siRNA组的肿瘤转移结节、肝脏转移结节、腹水明显减少.结论 RNA干扰Twist基因表达对肝细胞肝癌细胞侵袭转移有抑制作用,Twist可能成为肝细胞肝癌基因治疗的新靶点.
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