大肠埃希菌中λ-Red同源重组系统介导的trp和yfp基因融合表达的研究

来源 :上海交通大学学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:unix55555
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目的为研究大肠埃希菌中色氨酸合成酶a亚基编码基因(trpA)的表达,利用λ-Red系统将twA、黄色荧光蛋白基因(YfP)、氯霉素抗性编码基因(cat)融合片段敲入基因组中。方法将trpA、yfp、cat基因进行融合PCR,获得重组片段,转化人MGl655菌株中,利用pKD46编码的λ-Red系统将片段重组人基因组中,经PCR验证及测序鉴定正确后,荧光显微镜观察融合蛋白表达。结果成功获得trpA—YfP—cat重组片段,转化入MGl655菌株中获得阳性克隆,经测序鉴定正确。荧光显微镜观察可见细菌胞质内弥散
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