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基于已报道的甘蔗黄叶病毒(Sugarcane Yellow Leaf Virus,ScYLV)cp基因和高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)NSP基因序列设计特异性引物,建立了针对这两种病毒的实时荧光定量PCR(real time-quantitative,RT-qPCR)检测方法.在此基础之上,利用扩增产物TM值的不同,建立了可区分ScYLV与SrMV的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR方法,两种病毒扩增产物的TM值分别为80.8-82.8℃和84.6-86.6℃.检测数据显示:SrMV和ScYLV均有各自的特异性的峰值出现,而健康植株无特异性峰值;在单独检测中的检出水平可分别达到500copy/μL和250copy/μL;两种病毒TM值的批内变异系数分别为0.03％和0.02％,批间变异系数分别为2.06％和3.12％.综上所述,所建立的多重SYBRGreen-Ⅰ实时荧光定量PCR方法在对以上两种病毒的检测中具有较好的特异性、敏感性和稳定性.