【摘 要】
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目的 研究大鼠BMSCs与小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)复合后,施加动态应变刺激能否使BMSCs在体外分化为肌腱细胞(tcnocytes,TCs).方法 取1周龄SD大鼠骨髓,采
【机 构】
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四川大学华西医院,生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室,成都,610041;四川省人民医院辅助生殖中心
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目的 研究大鼠BMSCs与小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)复合后,施加动态应变刺激能否使BMSCs在体外分化为肌腱细胞(tcnocytes,TCs).方法 取1周龄SD大鼠骨髓,采用贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,并用多向分化诱导法和流式细胞仪检测进行鉴定.用生物力学试验机行SIS的拉伸破坏实验,计算SIS的弹性应变.将分离纯化后的第2代BMSCs以2.5×105 个/cm2细胞密度种植于3 cm×1 cm大小的SIS上,形成BMSCs-SIS复合物,固定于应变培养装置对其进行静态培养2d后,施加应变刺激(拉伸频率为0.02Hz,作用时间为15mim/h、12 h/d,应变幅度为5%)动态培养5 d,作为实验组:BMSCs-SIS复合物持续静态培养作为对照组;采用组织块法分离培养SD大鼠鼠尾TCs,用第2代TCs与SIS复合,相同条件下静态培养作为阳性对照组.扫描电镜观察应变培养后BMSCs形态变化,ELISA法检测培养后细胞上清液中2种TCs标志蛋白Scleraxis和Tenomodulin的含量.结果 分离培养的SD大鼠BMSCs经多向分化诱导后,可以分化为成骨细胞和脂肪细胞,且流式细胞仪检测示表面标志抗原CD34、CD45为阴性,CD90为阳性,符合BMSCs生物学特性.SIS拉伸破坏实验结果显示,SIS平均弹性应变为39.5%.扫描电镜观察示实验组材料上细胞具有类TCs形态;ELISA法检测示,实验组应变培养后细胞上清液中Scleraxis和Tenomodulin含量分别为(3.56 ±0.91)μmol/L 和(4.27± 1.10)μmol/L,阳性对照组分别为(14.73 ±2.30)μmol/L和(10.65±1.51)μmol/L,对照组分别为(0.23 ±0.14)μmol/L和(0.16±0.10)μmol/L;3组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 适当的应变刺激培养可在体外诱导BMSCs向TCs方向分化,尚需进一步研究最佳的应变刺激诱导条件.
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