【摘 要】
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目的克隆PAK5-N端基因并诱导其表达,进行多克隆抗体制备,为研究其在牙胚细胞中的生物学功能奠定基础.方法根据人全长PAK5 cDNA序列,设计引物;利用PCR技术,以PAK5全长cDNA为模
【机 构】
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南方医科大学,南方医院口腔科,广东,广州,510515Karolinska Institute Department of Biosciences and Nutrition,Sweden Huddi
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目的克隆PAK5-N端基因并诱导其表达,进行多克隆抗体制备,为研究其在牙胚细胞中的生物学功能奠定基础.方法根据人全长PAK5 cDNA序列,设计引物;利用PCR技术,以PAK5全长cDNA为模板扩增PAK5-N端基因,将扩增产物克隆至pGEX-4T-1载体中,经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后进行重组质粒鉴定,DNA测序.以硫代半乳糖苷诱导其在大肠杆菌BL21中表达.利用GST融合蛋白纯化系统进行蛋白纯化,通过免疫家兔制备多克隆抗体,并在牙胚细胞中进行了初步研究.结果和结论成功克隆了PAK5-N端基因,在E.coli中表达了PAK5-NT,并纯化了GST融合蛋白,制备了PAK5特异性抗体.Westernblotting表明PAK5在牙胚细胞中过度表达,为其在口腔细胞中的生物学功能研究提供了依据.
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