应用反向斑点杂交法检测耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变

• 作 者: 庞茂银 张文宏 胡忠义 莫凌 邹健 翁心华
• 机 构: 200040,上海,复旦大学华山医院传染科,200040,上海,复旦大学华山医院传染科,200040,上海,复旦大学华山医院传染科,200040,上海,复旦大学华山医院传染科,200040,上海,复旦
• 出 处: 中华传染病杂志
• 发表日期: 2004年22期
• 关键词: 结核分支杆菌 RPOB基因突变 利福平 斑点杂交法 耐药株 药敏 快速检测 目的 方法 手段 Reverse dot blot hybridization Dr

目的 探讨快速检测rpoB基因突变的敏感方法,以期建立适合我国国情的结核分支杆菌耐药株的快速检测手段.方法根据结核分支杆菌野生株序列,自行设计覆盖rpoB基因核心突变区的系列寡核苷酸探针并将其固定在尼龙膜上,然后应用生物素标记的特异性引物扩增包含核心突变区的rpoB基因片段,与固定在膜上的寡核苷酸探针杂交,对突变位点进行快速检测,并与药敏试验及DNA测序结果进行比较.结果应用反向斑点杂交法检测36株耐药株和22株敏感株rpoB基因的突变位点,并据此判断其对利福平的药敏特性,结果敏感性为88.9%,特异性为86.4%,药敏结果符合率为87.9%,与测序结果的符合率为89.7%.结论反向斑点杂交法可以快速、敏感地检测rpoB基因突变,进而早期判断结核分支杆菌对利福平的药敏特性。