表达纯化糖原合成酶激酶3β的两种方法比较

• 作 者: 许少飞 徐杰 黎明涛
• 机 构: 中山大学中山医学院蛋白质组学研究中心,中山大学中山医学院人体解剖学教研室
• 出 处: 南方医科大学学报
• 发表日期: 2011年3期
• 关键词: 糖原合成酶激酶3Β 大肠杆菌表达系统 杆状病毒昆虫细胞表达系统 glycogen synthase kinase 3β E.coli expression s

目的建立一套高纯度、高活性表达糖原合成酶激酶3β的技术。方法分别采用大肠杆菌和杆状病毒昆虫细胞蛋白表达系统表达糖原合成酶激酶3β,通过His和GST标签两步纯化目的蛋白,SDS-PAGE观察目的蛋白的纯度,激酶反应观察目的蛋白的活性。结果大肠杆菌表达纯化的糖原合成酶激酶3β占纯化后总蛋白的量为54%,昆虫细胞表达纯化的糖原合成酶激酶3β占纯化后总蛋白的量为96%;昆虫细胞来源的目的蛋白比大肠杆菌来源的目的蛋白活性高一倍左右。结论相比大肠杆菌表达的糖原合成酶激酶3β,昆虫细胞表达的目的蛋白具有更高的纯度和活