【摘 要】
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目的构建TIM-4-EGFP融合蛋白的原核表达载体,并评价表达的TIM-4-EGFP蛋白生物学活性。方法采用RT-PCR方法分别扩增TIM-4和EGFP的cDNA片段,将其克隆至pET28a重组质粒中。重组
【机 构】
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广西壮族自治区人民医院检验科,华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科,广西壮族自治区人民医院生殖医学中心
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(No.81260007);广西自然科学基金资助项目(No.2017GXNSFAA198074);广西卫生厅课题资助项目(No.Z2012316,No.Z2013403)
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目的构建TIM-4-EGFP融合蛋白的原核表达载体,并评价表达的TIM-4-EGFP蛋白生物学活性。方法采用RT-PCR方法分别扩增TIM-4和EGFP的cDNA片段,将其克隆至pET28a重组质粒中。重组载体转化大肠埃希菌BL21（DE3）,用IPTG诱导重组蛋白表达,经镍金属螯合层析柱纯化。通过SDS-PAGE蛋白电泳和Western blot鉴定重组蛋白。并通过荧光显微镜观察评价其生物活性。结果成功构建TIM-4-EGFP的原核表达载体并在大肠埃希菌中表达,TIM-4-EGFP融合蛋白经SDS-PA
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