鼠NF～IL～6反义真核表达载体的构建和鉴定

• 作 者: 郑小莉 谢晓东 罗波 梅志强 刘佳佳
• 机 构: 泸州医学院基础医学院生物化学教研室四川,泸州医学院教务处,泸州医学院基础医学研究中心,泸州医学院基础医学院免疫学教研室
• 出 处: 西南军医
• 发表日期: 2011年5期
• 关键词: NF~IL6 反义核酸 巨噬细胞 NF-IL6 antisense nucleic acid macrophage
• 基金项目: 四川省卫生厅项目（100208）

目的构建包含鼠细胞转录因子白介素6（NF～IL6）反义基因的部分功能区的重组反义真核表达载体pcDNA3.0/NF～IL6,为进一步研究鼠巨噬细胞中NF～IL6的功能奠定基础。方法 Trizol试剂法提取体外分离培养的鼠巨噬细胞总RNA,经逆转录聚合酶链式反应（RT～PCR）扩增NF～IL6基因目的片段,PCR产物及真核表达载体pcD-NA3.0分别双酶切并进行连接,转化入大肠杆菌Ecoli Dh5α扩增后获得重组载体。结果 RT～PCR获得预期大小的特异性NF～IL6 DNA片段,经PCR、双酶切及测序