【摘 要】
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目的 研究自噬在不同阶段对VX2细胞增殖、侵袭和转移的影响.方法 将VX2细胞分为对照组、3-甲基嘌呤(3-MA)组、缺血缺氧(I/H)组、I/H+3-MA组、再灌注组、再灌注+3-MA组.荧光显
【机 构】
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河南科技大学临床医学院 河南科技大学第一附属医院介入科,河南 洛阳 471003;新乡医学院基础医学院组织学与胚胎学教研室,河南 新乡 453003
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目的 研究自噬在不同阶段对VX2细胞增殖、侵袭和转移的影响.方法 将VX2细胞分为对照组、3-甲基嘌呤(3-MA)组、缺血缺氧(I/H)组、I/H+3-MA组、再灌注组、再灌注+3-MA组.荧光显微镜观察各组细胞吖啶橙染色后细胞质内自噬泡数量;Western blot检测LC3及P62(P62/SQSTM1)信号蛋白、基质金属蛋白酶MMP2、MMP9蛋白表达情况;MTT实验测定细胞存活情况;细胞划痕实验观察迁移能力;Transwell实验评价VX2细胞迁移及侵袭能力.结果 缺血缺氧早期吖啶橙标记的橙色或红色自噬泡增多,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达增大、P62表达减少,加入3-MA后细胞存活数目由0.38±0.01减至0.25±0.01(P<0.05);I/H后、再灌注后LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达进一步增大(P<0.01),同时MMP2、MMP9蛋白表达也增加,侵袭性细胞计数高于对照组(121.0±5.2 vs 78.3±7.3,P<0.01);加入3-MA后细胞存活数目由0.50±0.01增加到0.61±0.01(P<0.05),侵袭性细胞计数高于再灌注+3-MA组(121.0±5.2 vs 70.0±2.1,P<0.05).结论 缺血缺氧可诱导VX2细胞产生保护性自噬;再灌注后自噬过度激活,对细胞有杀伤作用,联合3-MA抑制自噬细胞存活增多、侵袭性减低;再灌注后VX2肝癌细胞自噬增强促进VX2细胞迁移与侵袭,这可能是局部浸润和远处转移的机制之一,可能为肝动脉化疗栓塞(TACE)术后肝细胞癌(HCC)的复发、转移治疗提供理论基础.
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