【摘 要】
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为构建表达猪圆环病毒3型（PCV3）免疫保护性抗原的重组乳酸乳球菌，并在小鼠体内评估其免疫原性，本研究利用同源重组技术分别将PCV3 Cap基因及其与M细胞靶向肽Co1基因的融合基因分别克隆至乳酸乳球菌NZ3900配套的p NZ8149载体中，电转化受体菌后，构建两株重组乳酸乳球菌pNZ8149-Cap/NZ3900和pNZ8149-Cap-Co1/NZ3900，经Nisin诱导后利用wester
【基金项目】
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广东省基础与应用基础研究基金企业联合基金（公共卫生与医药健康领域）项目（2021A1515220027）； 湛江市科技发展专项资金竞争性分配项目（2020A01045）； 辽宁省自然科学基金博士启动项目（20190540138）；
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为构建表达猪圆环病毒3型（PCV3）免疫保护性抗原的重组乳酸乳球菌，并在小鼠体内评估其免疫原性，本研究利用同源重组技术分别将PCV3 Cap基因及其与M细胞靶向肽Co1基因的融合基因分别克隆至乳酸乳球菌NZ3900配套的p NZ8149载体中，电转化受体菌后，构建两株重组乳酸乳球菌pNZ8149-Cap/NZ3900和pNZ8149-Cap-Co1/NZ3900，经Nisin诱导后利用western blot检测重组蛋白的表达，结果显示，Cap蛋白及Cap-Co1融合蛋白在重组乳酸乳球菌中均正确表达。将诱导后的两株重组菌口服免疫BALB/c小鼠，采用ELISA分别测定了免疫后不同时间（0、14 d、28 d和42 d）小鼠粪便中分泌型IgA（SIgA）和血清中IgG抗体水平，并利用流式细胞术检测免疫小鼠CD4+和CD8+T细胞水平，利用ELISA试剂盒检测小鼠IFN-γ和IL-4细胞因子含量。结果显示，与对照组相比，两株重组乳酸乳球菌免疫小鼠血清中IgG抗体水平无明显变化，而SIgA抗体水平极显著升高（P＜0.001）；同时，免疫小鼠CD4+T细胞和CD8+T细胞的比值和细胞因子含量均极显著高于对照组（P＜0.01、P＜0.001）；而且pNZ8149-Cap-Co1/NZ3900免疫小鼠后能够比pNZ8149-Cap/NZ3900免疫组诱导更高水平的免疫反应（P＜0.05）。本研究首次证实表达PCV3 Cap蛋白的重组乳酸乳球菌口服免疫小鼠后能够刺激其产生特异性的黏膜免疫抗体及细胞免疫反应，为PCV3乳酸菌口服疫苗的研发奠定了基础。
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