7-脱氢胆固醇还原酶基因沉默对体外培养腭突音猬基因-骨形成蛋白2信号通路的影响

• 作 者: 张岱尊 许尧祥 肖文林 庄翠竹
• 机 构: 266003山东,青岛大学附属医院儿童口腔科,青岛大学附属医院黄岛院区口腔科,青岛大学附属医院黄岛院区口腔科,青岛大学附属医院黄岛院区口腔科
• 出 处: 中华口腔医学杂志
• 发表日期: 2014年49期
• 关键词: Palate Cleft palate Gene silencing Maxillofacial development

目的 研究沉默7-脱氢胆固醇还原酶(7-dehydrocholesterol reductase,Dhcr-7)表达对体外培养腭突器官中音猬基因(sonic hedgehog,Shh)-骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)信号通路的影响,探讨Dhcr-7参与腭突发育的信号通路.方法 取60只孕期(gestation day,GD) 13.5d小鼠胚胎根据简单随机抽样法平均分为3组:空白对照组(A组):不含胆固醇培养基培养腭突;Dhcr-7基因沉默组(B组):不含胆固醇培养基培养腭突+Dhcr-7-siRNA腺病毒;添加胆固醇组(C组);每组各20只.培养48 h后,A、B组更换不含胆固醇培养基,C组更换含有600 mg/L胆固醇培养基.继续培养72 h后,分别将腭突固定,组织染色和扫描电镜观察其形态变化;分别提取腭突RNA和蛋白质,应用反转录-聚合酶链反应(reverse transcriotion-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测Dhcr-7、Shh和BMP-2表达量的变化.结果 组织染色和扫描电镜显示A组及C组腭突能完全融合,B组腭突未融合.Shh和BMP-2在B组的mRNA和蛋白质的表达量随Dhcr-7表达量降低而降低.B组mRNA和蛋白质的表达量Shh为0.063±0.018和0.092±0.065;BMP-2为0.054±0.018和0.049±0.021;A组mRNA和蛋白质的表达量Shh为0.667±0.093和0.639±0.078;BMP-2为0.591±0.043和0.569±0.081.A、B两组Shh和BMP-2的mRNA和蛋白质的表达量差异分别具有统计学意义(P＜0.05);C组Dhcr-7的mRNA表达量(0.074±0.034)和蛋白质表达量(0.075±0.028)基本无变化,与B组(Dhcr-7的mRNA表达量为0.083±0.045;蛋白质表达量为0.067±0.065)相比,差异无统计学意义(P＞0.05);RNA和蛋白质的表达量Shh(0.649±0.085和0.608±0.092)和BMP-2(0.578±0.062和0.548±0.065)均明显升高,与B组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Dhcr-7可影响Shh和BMP-2的表达,Dhcr-7通过Shh-BMP-2信号通路调控腭突发育。