核转运信号蛋白1选择性抑制剂KPT－330诱导白血病细胞凋亡的分子机制

• 作 者: 杜薇薇 李之珩 李晓璐 曹岚 陶燕芳 徐利晓 任俊丽 潘健 卢俊
• 机 构: 215001 苏州大学附属儿童医院血液/肿瘤科,215001 苏州大学附属儿童医院儿科研究所,215001 苏州大学附属儿童医院儿科研究所,215001 苏州大学附属儿童医院血液/肿瘤科,215001
• 出 处: 中华实用儿科临床杂志
• 发表日期: 2017年32期
• 关键词: KPT-330 核转运信号蛋白1 白血病细胞 凋亡 长链非编码RNA

目的

探讨核转运信号蛋白1(CRM1)选择性抑制剂KPT－330对急性白血病细胞凋亡的诱导作用及可能的分子机制。

方法

白血病细胞株[人急性早幼粒白血病细胞(NB4)、人慢性粒细胞白血病细胞(K562)、人急性早幼粒白血病细胞(HL－60)]分为对照组(不予KPT－330处理)和KPT－330处理组(予终浓度0.01、0.10、0.20、0.50、1.00、5.00、10.00 μmol/L KPT－330孵育细胞)。应用细胞计数试剂盒(CCK－8)比色法观察KPT－330对白血病细胞的生长抑制作用；应用荧光显微镜观察KPT－330诱发白血病细胞形态的变化；应用Annexin V/PI标记流式细胞术分析KPT－330诱发的细胞凋亡；Western blot检测CRM1表达量及凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－9 (Caspase－9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase－3)、DNA修复酶(poly ADP－ribose polymerase，PARP)的表达水平和活化状态；基因芯片分析KPT－330对急性白血病细胞基因表达谱及长链非编码RNA(lncRNA)表达谱的影响。

结果

KPT－330呈剂量依赖性抑制白血病细胞的生长，并使CRM1表达下调；与对照组相比，实验组细胞出现了明显的形态异常，较低浓度的KPT－330(0.2 μmol/L和1.0 μmol/L)即可导致白血病细胞的明显凋亡，0.2 μmol/L KPT－330 24 h处理组NB4、K562、HL－60细胞凋亡率(%)分别为(4.95±0.21)%、(14.05±0.07)%、(4.95±0.63)%；0.20 μmol/L KPT－330 48 h处理组(6.10±0.56)%、(20.75±0.21)%、(5.85±0.07)%; 1.00 μmol/L KPT－330 24 h处理组(41.15±0.21)%、(35.45±0.35)%、(15.65±0.07)%；1.00 μmol/L KPT－330 48 h处理组(52.45±0.35)%、(47.45±2.47)%、(16.80±1.98)%，与对照组[24 h NB4、K562、HL－60：(3.30±0.28)%、(9.50±0.56)%、(2.00±0.14)%；48 h NB4、K562、HL－60：(3.70±0.14)%、(3.50±0.28)%、(2.15±0.21)%]比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。在多种白血病细胞中均出现G₂期细胞显著减少，以及subG₁期细胞的增加，活化型Caspase－3、Caspase－9和PARP蛋白表达水平增加。基因芯片分析表明KPT－330诱导白血病细胞凋亡可能与Toll样受体(TLR)信号及谷胱甘肽代谢信号通路等密切相关。

结论

CRM1抑制剂KPT－330可显著抑制白血病细胞增殖，促进细胞凋亡。KPT－330诱导白血病细胞凋亡可能与TLR信号以及谷胱甘肽代谢信号通路等相关。