【摘 要】
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目的 获得重组抗死亡受体5(DR5)全长人-鼠嵌合抗体表达并研究其生物学活性.方法 利用具有自我剪切能力的弗林蛋白酶(Furin)/口蹄疫病毒2A多肽(F/2A)连接人-鼠嵌合抗体的重链
【机 构】
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中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室
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目的 获得重组抗死亡受体5(DR5)全长人-鼠嵌合抗体表达并研究其生物学活性.方法 利用具有自我剪切能力的弗林蛋白酶(Furin)/口蹄疫病毒2A多肽(F/2A)连接人-鼠嵌合抗体的重链和轻链,形成一个开放阅读框(ORF),插入慢病毒表达载体pWPXL,构建重组抗DR5全长人-鼠嵌合抗体表达载体pWPXL-HF2AL;采用Western印迹测定该嵌合抗体的表达和采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其与抗原的结合特异性;使用四唑氮盐(MTS)比色法分析其对肿瘤细胞的杀伤活性.结果 利用F/2A多肽技术表达的人-鼠嵌合抗体可在F/2A处自我剪切,人-鼠嵌合抗体的轻、重链表达对称并具有与其母本鼠源抗体相似的亲和力和杀伤多种肿瘤细胞的活性.如含3μg/ml嵌合抗体的培养基使结肠癌细胞HCT116、肝癌细胞SMMC7721、肺癌细胞A549和神经胶质瘤细胞U251的细胞存活率分别降低至20.6%±2.6%,35.1%±2.7%,76.1%±6.2%和15.6%±2.0%.结论 成功实现F/2A多肽介导的全长人-鼠嵌合抗体的表达,为肿瘤的生物治疗提供了新的策略.
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