小鼠cAMP依赖的蛋白激酶催化亚基α的重组表达研究

• 作 者: 陈长征 范均 许正平 夏其昌 李伯良 王应睐
• 机 构: 中国科学院上海生物化学研究所,浙江大学生物科学与技术系
• 出 处: 生物化学杂志
• 发表日期: 1996年6期
• 关键词: 蛋白激酶 重组表达 亚基α 环腺苷酸 cAMP-dependent protein kinase (cAPK) Expression Maltose bin

将小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶（ｃＡＰＫ）催化亚基α（ｍＣα）分别以成熟、麦芽糖结合蛋白（ＭＢＰ）融合以及Ｎ端连续六个组氨酸（Ｈｉｓ_６）融合的形式在大肠杆菌中得到了高效表达，且成熟及融合的重组ｍＣα均有明显的蛋白激酶活性，表明蛋白激酶催化核心结构具有相对的独立性。其中Ｈｉｓ_６－ｍＣα可利用金属离子（Ｎｉ￣（２＋））配体亲和层析（Ⅰ－ＭＡＣ）一步纯化，所得融合蛋白可通过Ｈｉｓ_６亲合手臂（Ｔａｇ）固相化于金属离子（Ｎｉ￣（２＋））配体亲和树脂上，为进一步利用ＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙ多肽库筛选ｃＡＰＫ识别的