【摘 要】
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目的建立无血清无蛋白无动物源性培养基BD001悬浮培养MDCK-siat7e细胞的工艺,为MDCK-siat7e细胞的生物反应器规模化培养及病毒性疫苗的研制提供依据。方法采用BD001驯化MDCK-
【机 构】
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兰州生物制品研究所有限责任公司第六研究室,
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目的建立无血清无蛋白无动物源性培养基BD001悬浮培养MDCK-siat7e细胞的工艺,为MDCK-siat7e细胞的生物反应器规模化培养及病毒性疫苗的研制提供依据。方法采用BD001驯化MDCK-siat7e细胞,建立无血清无蛋白无动物源性MDCK-siat7e细胞库,对细胞库进行常规检定,观察MDCK-siat7e细胞的生长形态;比较不同起始接种密度（4.0×105、8.0×105、1.6×106 cells/ml）悬浮培养,MDCK-siat7e细胞达到平台期的时间、平台期细胞密度及活率;比较不同规模生物反应器（3、15、60 L）无血清无蛋白无动物源性培养MDCK-siat7e细胞对数生长期的比生长速率（μ）、分裂次数（Cd）、葡萄糖比消耗速率(qgluc)、乳酸对葡萄糖的转化率(Ylac/gluc),观察细胞的生长和代谢情况。结果建立的无血清无蛋白无动物源性MDCK-siat7e细胞库复苏后细胞平均活率为（96.20±2.95）%。MDCK-siat7e细胞在BD001培养基中复苏传代后生长状态良好,经过24 h潜伏期后,进入对数生长期,第6天进入平台期,第8天达最大细胞密度（6.2×106 cells/ml）,维持至第12天细胞密度和活率开始下降,进入衰亡期。MDCK-siat7e细胞在无血清培养基中生长良好;不同起始接种密度MDCK-siat7e细胞达到平台期的时间差异有统计学意义（P<0.05）,平台期细胞密度及活率差异无统计学意义（P>0.05）;不同规模生物反应器培养的MDCK-siat7e细胞的μ、Cd、qgluc、Ylac/gluc差异均无统计学意义（P>0.05）,细胞生长代谢良好。结论建立了生物反应器无血清悬浮培养MDCK-siat7e细胞的工艺,为病毒性疫苗生产中采用无血清无蛋白、无动物源性培养基,生物反应器规模化培养MDCK-siat7e细胞提供了一定的实验依据。
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