EGFL7原核表达载体的构建及鉴定

• 作 者: 谢平丽 李峰 李跃辉 王宇环 罗晓玲 李官成
• 机 构: 中南大学肿瘤研究所,深圳市合一康生物科技有限公司
• 出 处: 医学临床研究
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: 表皮生长因子/遗传学 大肠杆菌 基因扩增 遗传载体 Epidermal Grow th Factor/GE Escherichia coli Gene Ampl
• 基金项目: 横向课题肿瘤抗原负载DC疫苗诱导的抗肿瘤作用

【目的】构建类表皮生长因子域7（EGFL7）原核表达载体，并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。【方法】以人肝癌细胞系 HepG2总RNA为模板，PCR扩增 EGFL7基因，克隆至原核表达载体pET‐21a（＋）中，转化大肠杆菌 BL21（DE3），IPTG 诱导表达。 His‐tag 磁珠纯化重组蛋白 EGFL7，SDS‐PAGE 鉴定。【结果】克隆目的基因序列正确，未发生碱基突变；重组表达质粒pET21a（＋）‐TRX‐EGFL7经双酶切鉴定构建正确；表达的重组蛋白相对分子量为80 kD ，与预期相符。【结论】成功在大肠杆菌BL21（DE3）中表达并纯化了EGFL7重组蛋白，为后续研究奠定了基础。