重组人瑞替普酶基因在山羊胎儿成纤维细胞β-酪蛋白基因座的定点整合

• 作 者: 王宏 沈子龙 奚涛 李治国 刘红如 赵周英 吴国
• 机 构: 中国药科大学生命与科学技术学院,中国药科大学生命与科学技术学院,上海市转基因研究中心
• 出 处: 中国药科大学学报
• 发表日期: 2005年1期
• 关键词: 体细胞 基因打靶 胎儿成纤维细胞 乳腺生物反应器 重组人瑞替普酶 Somatic cell Gene targeting Fetal fibroblasts M
• 基金项目: 国家高技术研究发展计划(863计划)

目的:利用体细胞基因打靶技术来获得定点整合有重组人瑞替普酶(rPA)的山羊胎儿成纤维细胞株.方法:构建了针对山羊β-酪蛋白基因座的定点打靶载体,其上游同源臂为β-酪蛋白启动子端同时包含其信号肽编码区长约6.1 kb的基因组片段,下游同源臂为3.3 kb从β-酪蛋白外显子6至外显子9的基因组片段.rPA小基因起始密码子位于β-酪蛋白信号肽编码区下游.将载体瞬时转染C127小鼠乳腺癌细胞,并通过激素进行诱导,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测细胞培养上清中的rPA表达量来验证载体表达功能.将载体通过电穿孔的方