论文部分内容阅读
目的:探讨索拉非尼对肿瘤细胞凋亡的影响以及涉及髓样细胞白血病-1(Mcl-1)下调的作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测索拉非尼对肠嗜铬细胞(EC细胞，购自美国典型菌种保藏中心)增殖的影响，以确定索拉非尼的作用浓度和作用时间。将EC细胞分为4组：对照组、索拉非尼组、索拉非尼＋短发夹RNA以下调荧光素酶的质粒(shLuc)组和索拉非尼＋细胞外调解蛋白激酶下游作用底物磷酸化ets样基因-1(Elk-1)短发夹RNA(shElk-1)组。流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率，蛋白质印迹法(Western blot)和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、Elk-1、Mcl-1、蛋白激酶B(Akt)和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的蛋白及mRNA的相对表达量。多组间比较采用单因素方差分析。结果:1、5和10 mol/L的索拉非尼作用后EC细胞的存活率分别为(67.42±5.08)%、(50.81±6.11)%和(38.49±5.41)%，显著低于0 mol/作用浓度(99.98±0.25)%(n t1＝5.148，n t5＝2.142，n t10＝1.764，n P值均0.05)，而Elk-1 mRNA、Mcl-1蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(n tElk-1 mRNA＝2.266，n tElk-1 mRNA＝0.045，n tMcl-1蛋白＝2.774，n tMcl-1 mRNA＝2.987，n P值均<0.05)，差异均有统计学意义。与索拉非尼组比较，索拉非尼＋shElk-1组细胞Elk-1蛋白及mRNA、Mcl-1蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(n tElk-1蛋白＝5.340, n tElk-1 mRNA＝6.240, n tMcl-1蛋白＝6.248，n tMcl-1 mRNA＝5.217，n P值均<0.05)，差异均有统计学意义。与对照组比较，索拉非尼组细胞Akt蛋白及mRNA、GSK3β蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(n tAkt蛋白＝3.579，n tAkt mRNA＝3.641，n tGSK3β蛋白＝2.694，n tGSK3β mRNA＝3.091，n P值均<0.05)；与索拉非尼组比较，索拉非尼＋shElk-1组细胞Akt蛋白及mRNA、GSK3β蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(n tAkt蛋白＝8.041，n tAkt mRNA＝6.342，n tGSK3β蛋白＝4.391，n tGSK3β mRNA＝8.327，n P值均<0.05)，差异均有统计学意义。n 结论:索拉非尼可促进EC细胞凋亡，其机制可能与抑制Elk-1/Mcl-1和Akt/GSK3β通路有关。